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- An Overview of Monkeypox Virus Detection in Different Clinical Samples and Analysis of Temporal Viral Load DynamicsPublication . Cordeiro, Rita; Pelerito, Ana; de Carvalho, Isabel Lopes; Lopo, Sílvia; Neves, Raquel; Rocha, Raquel; Palminha, Paula; Verdasca, Nuno; Palhinhas, Cláudia; Borrego, Maria José; Manita, Carla; Ferreira, Idalina; Bettencourt, Célia; Vieira, Patrícia; Silva, Sónia; Água-Doce, Ivone; Roque, Carla; Cordeiro, Dora; Brondani, Greice; Santos, João Almeida; Martins, Susana; Rodrigues, Irene; Ribeiro, Carlos; Núncio, Maria Sofia; Gomes, João Paulo; Batista, Fernando da ConceiçãoMpox is a zoonotic disease caused by the Monkeypox virus (MPXV), and since May 2022, tens of thousands of cases have been reported in non-endemic countries. We aimed to evaluate the suitability of different sample types for mpox diagnostic and assess the temporal dynamics of viral load. We evaluated 1914 samples from 953 laboratory-confirmed cases. The positivity rate was higher for lesion (91.3%) and rectal swabs (86.1%) when compared with oropharyngeal swabs (69.5%) and urines (41.2%), indicating higher viral loads for the former. Supporting this, lesion and rectal swabs showed lower median PCR C values (C = 23 and C = 24), compared to oropharyngeal swabs and urines (C = 31). Stable MPXV loads were observed in swabs from lesions up to 30 days after symptoms onset, contrasting with a considerable decrease in viral load in rectal and oropharyngeal swabs. Overall, these results point to lesion swabs as the most suitable samples for detecting MPXV in the 2022-2023 multicountry outbreak and show comparable accuracy to rectal swabs up to 8 days after symptoms onset. These findings, together with the observation that about 5% of patients were diagnosed through oropharyngeal swabs while having negative lesions, suggest that multisite testing should be performed to increase diagnostic sensitivity.
- Diagnóstico laboratorial de casos clínicos suspeitos de infeção por Toxoplasma gondii, 2009-2020Publication . Reis, Tânia; Vilares, Anabela; Martins, Susana; Ferreira, Idalina; Gargate, Maria JoãoO estudo foi realizado com o objetivo de descrever as características demográficas de pacientes com quadro clínico suspeito de toxoplasmose. O diagnóstico laboratorial destes casos foi confirmado no Laboratório Nacional de Referência em Infeções Parasitárias e Fúngicas do Instituto Nacional de Saúde Doutor Ricardo Jorge, entre janeiro de 2009 e dezembro de 2020. Toxoplasma gondii é um protozoário intracelular obrigatório e o agente etiológico da toxoplasmose, que pode infetar a grande maioria dos vertebrados, incluindo humanos. A transmissão da infeção toxoplasmática ocorre pela ingestão de qualquer uma das formas de resistência (sejam os cistos contidos na carne de animais infetados ou os oocistos expelidos nas fezes de felinos que, no solo e após a esporulação, tornam-se infeciosos e contaminam os alimentos e a água), bem como a transmissão placentária, por meio da passagem dos taquizoítos da mãe para o feto. Para o diagnóstico laboratorial da infeção adquirida, foram utilizados métodos sorológicos (Aglutinação Direta (AD), Ensaio Fluorescente Enzimático (ELFA), Ensaio de Aglutinação Imunoabsorvente com Imunoglobulina (ISAGA), e Immunoblot (IB) e métodos moleculares (PCR em tempo real) amplificação da região repetida do REP-529pb. Para o diagnóstico laboratorial da infeção congênita (pré e pós-natal), foram realizadas as mesmas metodologias descritas anteriormente, bem como a inoculação em camundongos utilizando diferentes produtos biológicos, nomeadamente sangue materno e recém-nascido, líquido amniótico e placenta. Durante o período de estudo de 12 anos, foram analisadas amostras biológicas de 6.658 casos suspeitos de toxoplasmose, dos quais 1.663 casos positivos foram confirmados (25%). Destes, 1.638 (98,5%) correspondem a pacientes com infeção toxoplasmática adquirida e 25 (1,5%) a pacientes com infeção toxoplasmática congênita. Os resultados indicam que a identificação dos casos de toxoplasmose no estudo corrobora os resultados referenciados em estudos anteriores e demonstra a importância do diagnóstico laboratorial e da vigilância sistemática desta infeção. Essa vigilância é particularmente importante em gestantes e em indivíduos imunocomprometidos, por se tratar de grupos populacionais onde essa parasitose é responsável por elevados índices de morbidade e letalidade.
- First Report of Echinococcus ortleppi in Free-Living Wild Boar (Sus scrofa) from PortugalPublication . Mateus, Teresa Letra; Gargaté, Maria João; Vilares, Anabela; Ferreira, Idalina; Rodrigues, Manuela; Coelho, Catarina; Vieira-Pinto, MadalenaCystic echinococcosis (CE) is a zoonosis that is prevalent worldwide. It is considered endemic in Portugal but few studies have been performed on Echinococcus granulosus sensu lato and their hosts. In this study, CE cysts are reported for the first time in a free-living wild boar (Sus scrofa) in Portugal. The presence of the metacestodes in the liver of the wild boar was identified by morphological features, microscopic examination and molecular analysis. The sequencing of part of the DNA nuclear ribosomal internal transcribed spacer-1 (ITS-1) region revealed a G5 genotype that presently corresponds to Echinococcus ortleppi. This is the first report of E. ortleppi in Portugal and to the best of the authors’ knowledge, in Europe. These results suggest that wild boar may be a host of CE, namely, crossing the livestock–wildlife interface, which has important public health implications. Wildlife reservoirs must be taken into account as CE hosts and surveillance of game as well as health education for hunters should be implemented using a One Health approach, with implementation of feasible and tailor-made control strategies, namely, proper elimination of byproducts in the field.
- Hidatidose quística humana: análise retrospetiva de casos diagnosticados e em monitorização entre 2008 e 2013Publication . Reis, Tânia; Vilares, Anabela; Ferreira, Idalina; Martins, Susana; Furtado, Cristina; Gargaté, Maria João
- Isolation and molecular characterization of Toxoplasma gondii isolated from pigeons and stray cats in Lisbon, PortugalPublication . Vilares, Anabela; Gargaté, Maria João; Ferreira, Idalina; Martins, Susana; Júlio, Cláudia; Waap, Helga; Ângelo, Helena; Gomes, João PauloCats and pigeons are important factors in the epidemiology of Toxoplasma gondii as felids are the only definitive hosts that can excrete environmentally resistant oocysts, and pigeons share the same places of cats and humans constituting a good model and indicator of the ground field contamination. We aimed to study the virulence and genotypes of T. gondii isolated from pigeons and stray cats in Lisbon, Portugal. Fresh samples of brain from 41 pigeons and 164 cats revealing antibodies to T. gondii were inoculated in mice. Three isolates (one isolated from a cat and two isolated from pigeons) were virulent in the mouse model. Sag2-based genotyping of T. gondii was achieved in 70.7% (29/41) of samples isolated from pigeons (26 samples were type II, two were type III, and one strain was type I). From the cat brain samples, 50% (82/164) yielded Sag2 positive results, where 72 belonged to genotype II and 10 were no type III (it was not possible to discriminate between type I and II). Further genotyping was obtained by multiplex PCR of 5 microsatellites (TUB2, TgM-A, W35, B17, B18), allowing the identification of two recombinant strains that had been previously identified as type II by Sag2 amplification (one isolated from cat brain and the other from pigeon brain). This is the first evidence of recombinant strains circulating in Portugal and the first report of T. gondii genotyping from cats in this country. This study also highlights the importance of environmental contamination in the synanthropic cycle constituting a potential source of human infection.
- Leishmaniase: confirmação laboratorial de casos clínicos suspeitos de infeção entre 2008 e 2013Publication . Martins, Susana; Vilares, Anabela; Ferreira, Idalina; Reis, Tânia; Gargaté, Maria João
- Malária: confirmação laboratorial de casos clínicos suspeitos de infeção por Plasmodium sp entre 2010-2017Publication . Reis, Tânia; Martins, Susana; Ferreira, Idalina; Vilares, Anabela; Gargate, Maria JoãoA malária é uma infeção parasitária causada por um protozoário intracelular obrigatório (género Plasmodium), cuja transmissão é assegurada quando uma fémea de mosquito género Anopheles infetada efetua a sua refeição de sangue num indivíduo. Estão descritas mais de 150 espécies mas apenas 5 infetam o Homem: P. falciparum, P. vivax, P. malariae, P. ovale e mais recentemente, P. knowlesi, uma espécie que causa malária em macacos no sudeste asiático. É a doença parasitária mais frequente para o Homem, encontrando-se infetada cerca de 5% da população mundial, sendo o P. falciparum o agente mais disseminado, responsável por mais de 80% dos casos mundiais e o que apresenta uma patogenia mais agressiva. O objetivo deste estudo foi descrever as características demográficas dos casos de malária, em doentes com quadro clinico compatível e cujo diagnóstico laboratorial foi confirmado. As metodologias de diagnóstico utilizadas foram, serológicas (IFI), moleculares (PCR em tempo real, adaptada de Swan et al.) e a pesquisa direta em gota espessa e esfregaço. Foram analisadas 700 amostras, 15 das quais provenientes do sur to de ébola (África Ocidental, 2014/2015). Detetaram-se 103 (14,7%) casos positivos. Todos os casos positivos de malária são impor tados. A maioria dos casos ocorreu em viajantes, indivíduos adultos. Pelo facto da transmissão local continuar a ser possível na Europa e pela quantidade de viagens efetuadas entre a Europa e os países endémicos, salienta-se a necessidade de vigilância e prevenção desta parasitose.
- Malária: estudo retrospetivo de casos clínicos suspeitos de infeção por Plasmodium sp. (2010-2020)Publication . Reis, Tânia; Martins, Susana; Ferreira, Idalina; Vilares, Anabela; Gargate, Maria JoãoA malária, é uma infeção parasitária causada por um protozoário intracelular obrigatório (género Plasmodium), cuja transmissão é assegurada quando uma fémea de mosquito género Anopheles infetada efetua a sua refeição de sangue num individuo. Estão descritas mais de 150 espécies, mas apenas cinco infetam o Homem: P. falciparum, P. vivax, P. malariae, P. ovale e mais recentemente, P. knowlesi, uma espécie que causa malária em macacos no sudeste asiático. É a doença parasitária mais importante para o Homem, encontrando-se infetada cerca de 5% da população mundial, sendo o P. falciparum o agente mais disseminado, responsável por mais de 80% dos casos mundiais e o que apresenta uma patogenia mais agressiva. O objetivo deste estudo foi efetuar o diagnóstico laboratorial em doentes com quadro clínico compatível com malária e descrever as características demográficas nos casos confirmados. As metodologias de diagnóstico utilizadas foram, serológicas (IFI), moleculares (PCR em tempo real, adaptada de Swan et al. e a pesquisa direta em gota espessa e esfregaço. Foram analisadas 802 amostras, 15 das quais provenientes do surto de ébola (África ocidental, 2014). Detetaram-se 124 (15,5%; 124/802) casos positivos. Todos os casos positivos de malária são importados. A maioria dos casos ocorreu em de viajantes, indivíduos adultos. Pelo facto de a transmissão local continuar a ser possível na Europa e pela quantidade de viagens efetuadas entre a Europa e os países endémicos salienta se a necessidade de vigilância, e prevenção desta parasitose.
- Malária: estudo retrospetivo de casos clínicos suspeitos de infeção por Plasmodium sp. entre 2010 e 2014Publication . Reis, Tânia; Ferreira, Idalina; Martins, Susana; Vilares, Anabela; Gargate, Maria João[PT] A malária é uma infeção parasitária causada por um protozoário intracelular obrigatório (género Plasmodium), cuja transmissão é assegurada quando uma fémea de mosquito género Anopheles infetada efetua a sua refeição de sangue num indivíduo. Estão descritas mais de 150 espécies mas apenas 5 infetam o Homem: P. falciparum, P. vivax, P. malariae, P. ovale e mais recentemente, P. knowlesi, uma espécie que causa malária em macacos no sudeste asiático. É a doença parasitária mais frequentes para o Homem, encontrando-se infetada cerca de 5% da população mundial, sendo o P. falciparum o agente mais disseminado, responsável por mais de 80% dos casos mundiais e o que apresenta uma patogenia mais agressiva. O objetivo deste estudo foi descrever as características demográficas dos casos de malária, em doentes com quadro clinico compatível e cujo diagnóstico laboratorial foi confirmado. As metodologias de diagnóstico utilizadas foram, serológicas (IFI), moleculares (PCR em tempo real, adaptada de Swan et al.) e a pesquisa direta em gota espessa e esfregaço. Foram analisadas 471 amostras, 6 das quais provenientes do surto de ébola (África Ocidental, 2014). Detetaram-se 55 (11,7%) casos positivos. Todos os casos positivos de malária são importados. A maioria dos casos ocorreu em viajantes, indivíduos adultos. Pelo facto da transmissão local continuar a ser possível na Europa e pela quantidade de viagens efetuadas entre a Europa e os países endémicos, salienta-se a necessidade de vigilância e prevenção desta parasitose.
- Molecular and virulence characterization of Toxoplasma gondii strains isolated from humans in PortugalPublication . Vilares, Anabela; Gargaté, Maria João; Ferreira, Idalina; Martins, Susana; Gomes, João PauloToxoplasma gondii is an apicomplexan parasite responsible for toxoplasmosis which infects all warm-blooded vertebrates, including mammals and birds. The majority of studies conducted in Europe have revealed that more than 80 % of strains isolated from human infections belong to genotype II, whereas genotypes I and III are responsible for a small number of cases. Atypical and recombinant strains are generally associated with more severe infections. In Portugal, there is a lack of data concerning genetic diversity as the classical typing studies in humans have never been performed. We aimed to determine the Sag2 and microsatellite-based (TUB2, TgM-A, W35, B17, B18) genotypes of T. gondii isolated from humans in Portugal, as well as to study their virulence in mice. We analyzed 48 strains from congenital and acquired toxoplasmosis collected during the last two decades. Sag2-based genotyping of T. gondii was achieved in all 48 strains where 35 (73 %) were classified as type II and 13 (27 %) were type I. The multilocus PCR of five microsatellites allowed the classification of 10 strains (21 %) as recombinant strains that had been previously identified as type II or I by Sag2 typing. Seven out of the 48 strains, including three type I, three recombinant, and one type I, were virulent in mice. This study constitutes the first evidence of recombinant strains circulating in Portugal in humans from congenital infection, highlighting the need for a better evaluation of these strains as their phenotype is still barely understood.
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