DDI - Apresentações orais em encontros nacionais
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- Antimicrobial susceptibility of Escherichia coli strains isolated from food-producing, companion and wild animals, in Portugal – Characterization of isolates with reduced susceptibility to third generation cephalosporins and cephamycinsPublication . Clemente, Lurdes; Manageiro, Vera; Jones-Dias, Daniela; Ferreira, Eugénia; Correia, Ivone; Albuquerque, Teresa; Geraldes, Margarida; Matos, Filipa; Almendra, Claúdia; Themudo, Patrícia; Caniça, ManuelaEscherichia coli is a common inhabitant of the gastrointestinal tract of humans and animals, but is also a causative agent of diarrhea and extraintestinal infections. There is ongoing concern about the risks posed to human health by antimicrobial resistant bacteria isolated from animals. This study was conducted on 602 Escherichia coli isolates recovered from food-producing (n=217), companion (n=114) and wild animals (n=271), over the period of 2009-2013, to determine their antimicrobial susceptibility to a panel of ten antimicrobials (ampicillin, cefotaxime, ciprofloxacin, nalidixic acid, trimethoprim, sulfamethoxazole, chloramphenicol, streptomycine, gentamicine and tetracycline), through the determination of Minimum Inhibitory Concentration (MIC), using the agar dilution technique. Susceptibility to cefoxitin was determined through disk diffusion method. Molecular characterization of isolates showing a non-wild type MIC to cefotaxime was performed, to determine extended spectrum β-lactamases (ESBL), plasmid mediated AmpC (PMAβ), plasmid mediated quinolone (PMQR) resistance determinants and mobile genetic elements involved in the dissemination of resistance genes. Overall, isolates recovered from food producing animals showed higher frequencies of resistance towards all antimicrobials tested and multidrug resistance (MDR) (53%), followed by companion (43%) and wild animals (30%). Fifty isolates presented a non-wild phenotype to cefotaxime and resistance or intermediate susceptibility to cefoxitin, being 14 (12.3%) from pets, 19 (8.8%) from food producing animals and 17 (6.3%) from wild animals. Polymerase chain reaction and sequencing of the amplicons confirmed the presence of blaCTX-M-type (n=14), blaSHV-type (n=2), blaTEM-type (n=31), blaOXA-type (n=6) and plasmid-mediated AmpC β-lactamases (PMAβ) genes (n=8). Plasmid-mediated quinolone resistance-encoding genes were detected in ten isolates: aac(6')-Ib-cr (n=6) qnrB17 (n=1), qnrS1(n=1) and qnrB19 (n=2). Twenty five isolates carried class 1 integrons and two carried class 2 integrons. This study agrees that animals may act as important reservoirs of E. coli isolates carrying ESBL and PMAβ-encoding genes, which might be transmissible to humans through direct contact or the food chain and, a potential source for human pathogens to acquire these resistance genes.
- Bacterial biofilms, antibiotic resistance and healthcare-associated infections: a dangerous connectionPublication . Bandeira, Maria; Carvalho, Patrícia; Duarte, Aida; Jordão, LuísaIn 2012, were estimated 6.7 million cases of healthcare-associated infections (HAI) either in long-term care facilities or acute-care hospitals from which result 37,000 deaths configuring a serious public health problem [1]. The etiological agents are diverse and often resistant to antimicrobial agents. One of the mechanisms responsible for the emergence of drug resistance is biofilm assembly. Biofilms are defined as thin layers of microorganisms adhering to the surface of a structure, which may be organic or inorganic, together with the polymers that they secrete [2]. They are dynamic structures which experience different stages of organization with the ageing and are linked to an increase in bacterial resistance to host defense mechanisms, antibiotics, sterilization procedures other than autoclaving, persistence in water distribution systems and other surfaces. The understanding of bacteria organization within the biofilm and the identification of differences between planktonic and sessile forms of bacteria will be a step forward to fight HAIs. Bacterial isolates were grown in adequate medium. Antibiotic susceptibility was evaluated by broth microdilution method and interpreted according to NCCLS guidelines. A similar assay was performed to evaluate biofilm susceptibility to antibiotics. Bacteria ability to assemble biofilms was assayed by the microtiter-plate test [3] being tested in both abiotic (materials present in healthcare units) and biotic (Hella cells) surfaces. The biofilm structure was assessed by scanning electron microscopy (SEM) in either backscattered electron diffraction or secondary electrons mode. The kinetic of biofilm assembly depends on bacteria growth rate, incubation temperature and medium. Furthermore, the SEM analysis of planktonic and sessile forms of the same bacteria allowed the identification of structural differences which may be involved in virulence (Fig. 1). Bacteria ability to assemble biofilms seems to be independent of the abiotic structure (Fig.2). The same is not observed in biotic surfaces. This fact suggests that biofilm assembly in vivo is dependent of bacteria tropism. The minimum inhibitory concentration (MIC) determine for bacteria organized in biofilms is higher than for their planktonic forms. The increase ranges from 2 to 200 folds and is proportional to the ability of bacteria to assemble biofilms. Further studies will be conducted in order to prevent biofilm assembly within healthcare units which will result in a decrease of HAI and emergence of antibiotic resistant bacteria.
- A Bioinformática na Identificação dos Processos Moleculares de Interacção entre o Agente Patogénico e o HomemPublication . Borges, V.; Nunes, A.; Ferreira, R.; Borrego, M.J.; Gomes, João PauloQualquer processo infeccioso caracteriza-se por um “braço de ferro” contínuo entre o agente patogénico e o Homem. Se por um lado, o Homem tenta debelar a infecção através da complexa rede celular que caracteriza a resposta imunitária, por outro, o agente patogénico tenta escapar a essa resposta através da acumulação de mutações no seu genoma. De um modo geral, as mutações num gene podem ser sinónimas (quando não originam uma alteração de aminoácido) ou não-sinónimas (quando a proteína correspondente é alterada), sendo estas últimas, quando vantajosas, as principais responsáveis pela adaptação do agente infeccioso ao hospedeiro. A fixação de alterações não-sinónimas vantajosas resulta de um processo evolutivo denominado de “selecção positiva”. A bioinformática surge nos últimos anos como uma ferramenta acessível e indispensável para a análise dos dados genómicos que diariamente são gerados de forma exponencial. Neste âmbito, a bioinformática tem sido essencial, por exemplo, para a identificação dos processos moleculares de interacção entre o agente patogénico e o Homem, que decorrem durante o processo infeccioso. Na presente comunicação, a utilidade desta valência computacional é ilustrada tomando como modelo o processo infeccioso despoletado pela bactéria Chlamydia trachomatis. De facto, esta bactéria intracelular é caracterizada por um perfil bem definido de infecções no Homem, cujos diversos genótipos afectam distintamente o tecido ocular, os órgãos genitais e os nódulos linfáticos inguinais (via macrófagos), orgãos estes que exercem uma pressão selectiva distinta (resposta imunitária, pH, flora comensal, etc) sobre a bactéria. Através da utilização de várias plataformas de bioinformática para a análise específica das mutações que distinguem os vários genótipos de Chlamydia trachomatis, é possível identificar genes, que por força de uma selecção positiva, estão hipoteticamente envolvidos na adaptação/invasão aos vários tipos de células humanas infectadas, nomeadamente, células epiteliais das mucosas ocular e genital, e macrófagos. Noutras vertentes, este tipo de análise de detecção de selecção positiva teve já aplicações no desenvolvimento de uma vacina para o VIH bem como no esclarecimento da evolução da virulência do vírus Influenza, e pode ser aplicado a todo o sistema biológico.
- O Biólogo na Saúde - Análises ClínicasPublication . Lopo, SílviaA área das análises clínicas tem sofrido nos últimos tempos uma importante evolução, quer ao nível da abordagem diagnóstica, quer à introdução e implementação de novas metodologias. O Biólogo profissional do ramo de laboratório deverá ter o dever e a competência necessários ao desempenho das suas tarefas de forma excelente, com base na permanente atualização da formação nas áreas funcionais consideradas fundamentais em análises clínicas e na adequação das suas capacidades à multidisciplinaridade com que os profissionais deste ramo de laboratório se defrontam diariamente, seguros de que o objetivo final do seu trabalho é a obtenção de resultados fiáveis e de qualidade reconhecida pelos pares, tendo em vista o apoio ao diagnóstico clínico e o completo esclarecimento das respetivas patologias. O título de Especialista de análises clínicas ajuda o biólogo profissional de saúde na aquisição e valorização destas competências e encontra-se alinhado com as competências exigidas pela Associação Europeia para a Análises Clínicas. Para o efeito, vão ser dadas as orientações necessárias para o pedido de atribuição do Título de Especialista em análises clínicas – Ramo de Laboratório.
- Borreliose de Lyme: descrição clinica e laboratorial em doentes portuguesesPublication . Lopes de Carvalho, I.; Luz, T.; Gomes, M.S.; Parreira, P.; Núncio, M.S.Borrelia burgdorferi sensu lato (s.l.) é o agente etiológico da borreliose de Lyme (BL), uma das doenças transmitidas por carraças com maior impacto em Portugal. No Homem, B. lusitaniae está inequivocamente associada a causar doença no Homem, com dois casos clínicos reportados.
- Caracterização da Infeção A Haemophilus Influenzae em Crianças após a Introdução da Vacina para o Haemophilus Influenzae Serótipo B no Programa Nacional de VacinaçãoPublication . Bajanca-Lavado, Maria Paula; Betencourt, Célia; Cristóvão, PaulaINTRODUÇÃO: O Haemophilus influenzae (Hi) é um microrganismo Gram negativo cujo nicho ecológico é o trato respiratório humano. É responsável por infeções respiratórias e infeções invasivas graves como a meningite e septicemia, principalmente nas crianças. O Hi apresenta seis serotipos capsulares distintos: a, b, c, d, e, f. Até ao início do seculo XXI o serótipo b (Hib) era responsável pela maior parte dos casos de infeção invasiva. Assim, no ano 2000, foi introduzida a vacina para o Hib no Programa Nacional de Vacinação, para crianças até aos 5 anos de idade. O OBJECTIVO deste estudo é caracterizar as estirpes de Hi isoladas entre 2001 e 2010, de crianças em idade pré-escolar (≤ 5 anos), dando destaque ao serotipo capsular e à resistência aos antibióticos. MATERIAL E MÉTODOS: Caracterizaram-se 1550 estirpes de Hi isoladas no período pós vacinal, de 26 Laboratórios Hospitalares em Portugal. A produção de β-lactamase foi pesquisada com nitrocefin. A determinação da concentração inibitória mínima (CIM, mg/L) foi realizada pelo método de microdiluição em placa; os “breakpoints” utilizados foram os estabelecidos pelo CLSI. Foi efetuada a pesquisa de cápsula e caracterizado o serotipo capsular por “Polymerase Chain Reaction”. RESULTADOS: As infeções mais comuns foram: infeção respiratória: 51%; conjuntivite: 29,9%; otite: 11,6% e infeção invasiva: 3,4%; A resistência à ampicilina por produção de beta-lactamase foi caracterizada em 12,6% da amostra. Entre as estirpes não produtoras de β-lactamase detetaram-se 2,9% com diminuição da susceptibilidade à ampicilina (CIM ≥2 mg/L). Estas estirpes designam-se por BLNAR (β-lactamase negativas e resistentes à ampicilina). Trimetoprim/Sulfametoxasol (SXT) foi o antibiótico que apresentou resistência (I+R) mais elevada, com 29% das estirpes. Em relação ao serotipo capsular, 98,5% das estirpes não apresentavam cápsula, sendo caracterizadas como não capsuladas (NC). CONCLUSÃO: Os nossos resultados revelam uma alteração na epidemiologia da infeção a Hi após a introdução da vacina, com um aumento de estirpes NC e a caracterização de outros serotipos, como a, d, e, f. Na resistência aos antibióticos há a salientar um aumento das estirpes BLNAR. Os resultados apresentados demonstram a importância de dar continuidade a esta monitorização através de mais e melhores estudos de vigilância.
- Detection of cryptic species of Aspergillus with reduced susceptibility to antifungal agents in hospitalsPublication . Sabino, Raquel; Viegas, C.; Veríssimo, C.; Carolino, E.; Brandão, João; Simões, H.; Martins, C.; Clemons, K.V.; Stevens, D.A.Invasive aspergillosis is a fungal infection caused by Aspergillus spp. affecting mainly the immunocompromised. The mortality rate may reach 85%. Aspergillus identification should be based on molecular methods as there are species morphologically similar but distinct at the molecular level (cryptic species), with variable antifungal susceptibility profiles.
- Diagnóstico molecular das infeções fúngicas: o que há de novoPublication . Sabino, RaquelA apresentação enquadra-se na II Reunião da Rede Nacional para Vigilância Laboratorial das Infeções Fúngicas Invasivas e Subcutâneas e foca as novas metodologias moleculares disponíveis para o diagnóstico das infeções fúngicas invasivas e subcutâneas.