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  • Detecting Biothreat Agents: the Portuguese National Reference Laboratory Response
    Publication . Pelerito, Ana; Cordeiro, Rita; Núncio, Sofia
    At present, the threat of a biological terrorist event with a dangerous pathogen and its insidious impact are among the most, yet least understood, threats to civil society today. The use of manufactured weapon, such as bomb, will produce consequences limited in time hence the most of the damage occurs immediately. By contrast, the use of a biological weapon is an extended process whose scope and timing cannot be precisely controlled. Many biological agents could be used as biological weapons. The CDC bioterrorism list includes 45 biological agents that have been targeted as most likely to be used in bioterrorism attack. Of these, six have been designated as ‘‘high priority’’ agents: Bacillus anthracis, Yersinia pestis, Francisella tularensis, Brucella spp., botulinum toxin produced by Clostridium botulinum and Variola major virus. Beside the pathogenic impact, the use of these agents will likely produce widespread panic, which will quickly overwhelm local law enforcement, as well as providers of health care. Since the majority of these agents require an incubation period before disease becomes noticed, the terrorists often escape without notice. The Portuguese National Institute of Health (PNIH) is prepared to recognize and respond to a biological event, including bioterrorism, having responsibilities in the determination of the etiological agent’s and its susceptibility to antibiotics. In order to ensure quick and reliable results, a laboratory algorithm was developed, taking in account the human and technical resources available. This algorithm was tested within a framework of an external quality control scheme and the results obtained demonstrated that the performance of our lab is at the same level of other European reference labs, even if the human, technical and financial resources are quite different. The PNIH also have the responsibility to inform other health and criminal authorities whenever an unusual biological agent is detected. Therefore, the role of PNIH is essential, promoting a rapid laboratory response and contributing to risk communication between the several authorities with responsibilities in the establishment of preparedness plans and measures that will contribute to control and mitigate the effects of bioterrorism attack on public health.
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  • Antagonistic Regulation of Cystic Fibrosis Transmembrane Conductance Regulator Cell Surface Expression by Protein Kinases WNK4 and Spleen Tyrosine Kinase
    Publication . Mendes, Ana Isabel; Matos, Paulo; Moniz, Sónia; Luz, Simão; Amaral, Margarida D.; Farinha, Carlos M.; Jordan, Peter
    Members of the WNK (with-no-lysine [K]) subfamily of protein kinases regulate various ion channels involved in sodium, potassium, and chloride homeostasis by either inducing their phosphorylation or regulating the number of channel proteins expressed at the cell surface. Here, we describe findings demonstrating that the cell surface expression of the cystic fibrosis transmembrane conductance regulator (CFTR) is also regulated by WNK4 in mammalian cells. This effect of WNK4 is independent of the presence of kinase and involves interaction with and inhibition of spleen tyrosine kinase (Syk), which phosphorylates Tyr512 in the first nucleotide-binding domain 1 (NBD1) of CFTR. Transfection of catalytically active Syk into CFTR-expressing baby hamster kidney cells reduces the cell surface expression of CFTR, whereas that of WNK4 promotes it. This is shown by biotinylation of cell surface proteins, immunofluorescence microscopy, and functional efflux assays. Mutation of Tyr512 to either glutamic acid or phenylalanine is sufficient to alter CFTR surface levels. In human airway epithelial cells, downregulation of endogenous Syk and WNK4 confirms their roles as physiologic regulators of CFTR surface expression. Together, our results show that Tyr512 phosphorylation is a novel signal regulating the prevalence of CFTR at the cell surface and that WNK4 and Syk perform an antagonistic role in this process.
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  • Caracterização bioquímica e molecular de doentes com hipercolesterolemias genéticas
    Publication . Alves, A.C.; Medeiros, A.M.; Gomes, A.; Bourbon, M.
    O colesterol elevado no sangue contribui para o processo arterosclerótico, que está na base das doenças cardiovasculares (DCV). Perturbações no metabolismo lipídico podem dever-se a alterações nos receptores ou seus ligandos, como é o caso da Hipercolesterolemia Familiar (FH). A FH é uma doença autossómica dominante que se caracteriza a nível clínico por níveis elevados de cLDL, levando ao aparecimento prematuro de doenças cardiovasculares. A nível genético esta doença caracteriza-se por mutações em três genes: LDLR, APOB e PCSK9. O objectivo deste estudo foi analisar o perfil bioquímico e molecular de doentes com FH diagnosticada clinicamente e o aparecimento de doença cardiovascular prematura nos doentes referenciados ao Estudo Português de Hipercolesterolemia Familiar (EPFH).
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  • Analysis and Identification of Trihalomethanes in Lisbon Indoor Swimming Pools: Distribution, Determinants and Human Exposure
    Publication . Silva, Z.; Rebelo, H.; Silva, M.M.; Alves, A.; Cabral, C.; Almeida, A.C.; Aguiar, F.; Oliveira, A.; Nogueira, A.; Pinhal, H.; Matos, A.; Ramos, C.D.; Pacheco, P.; Aguiar, P.; Cardoso, A.S.
    Water disinfection methods are used in swimming pools to ensure an effective protection of users against microbiological pathogens, being chlorination the most common disinfection method used worldwide. The use of chlorine based treatment techniques has one strong drawback, which is the generation of disinfection by-products (DBPs), potentially harmful products that have been associated with respiratory and ocular symptoms, bladder cancer and adverse reproductive effects. Amongst DBPs, the most better characterized are trihalomethanes (THMs): chloroform (CF), bromoform (BF), bromodichloromethane (BDCM), and chlorodibromomethane (DBCM). In Portugal a specific legislation to assess the quality of swimming pools is inexistent. The guideline value used to evaluate total THMs in water (TTHMsW) is the one established in the Law 306/2007 - 100 μg/L. Some other water/air parameters were assessed by Law 5/97, WHO guidelines for safe recreational water environments (2006) and Standard 62.1 (2006) from American Society of Heating, Refrigerating, and Air-Conditioning Engineers (ASRHAE). The main goal of this investigation was to study the occurrence, distribution and determinants of THMs in indoor swimming pools. This will also enable an evaluation of the exposure of users to THMs. In order to achieve this goals, the characterization of water quality in 30 Lisbon indoor swimming pools, using chorine based treatment techniques, was made during a six month period. Several parameters such as TTHMs, CF, BDCM, DBCM, BF levels in water, free residual chlorine (FrCl), pH, TW, Tair, Hu, chemical oxygen demand (COD), and other, were determined in each pool, once a month. Statistical analysis was performed using the SPSS 17.0 software. Descriptive analysis was applied to all variables. Student’s t-test, Mann-Whitney tests and Spearman’s rank correlation coefficient were also used. Large variation in TTHMs and CF water levels between the pools was obtained, being CF the THM obtained in higher concentrations, with sporadic higher values than the allowed. In air, CF level (CFair) also presented occasional higher levels. There was a clear positive linear correlation between CFW and TTHMsW (R>0.95, p<0.01), CFW and CFair (R> 0.5; p<0.05), CFW and FrCl (R>0.2; p<0.05) and, CFw and Tw (R>0.2; p<0.05). Good correlations were also obtained between other THMs: BDCM and DBCM (R>0.5, p<0.01) and BF and DBCM (R>0.6; p<0.05). The strong positive correlation obtained between CFW and TTHMsW was expected, since, usually, CFW has the higher contribution to TTHMsW. CFW is often considered as a good indicator of TTHMs concentration in water. Therefore correlations between TTHMs and CFair, FrCl, and Tw were expected and observed: TTHMsW vs CFair (R>0.5; p<0.05), TTHMsW vs FrCl (R>0.2; p<0.05) and TTHMsW vs TW (R>0.2; p<0.01). In conclusion, reasonable water and air quality was obtained in the studied Lisbon swimming pools, although some pools presented high TTHMsW, CFW and CFair. These results clearly demonstrate that THMs monitoring is particularly important and that, in a near future, this should be extended to other DBPs. Furthermore, for conscious use of swimming pools, appropriate and targeted information about safe practices should be provided to pool users.
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  • Identificação molecular de Aspergillus fumigatus em amostras de ar interior
    Publication . Malta-Vacas, J.; Sabino, R.; Brito, M.; Viegas, C.
    Os bioaerossóis são essencialmente compostos por partículas fúngicas, bactéricas e esporos de plantas, sendo os fungos responsáveis pela produção de compostos orgânicos voláteis e micotoxinas. A sua presença no ar interior está associada a manifestações alérgicas, tóxicas e infecciosas. Tais respostas dependem não só da susceptibilidade do indivíduo como das espécies e concentrações de fungos presentes. Os trabalhadores de aviários e suiniculturas são profissionais com elevada exposição a estes agentes, pelo que têm maior risco de desenvolvimento de patologias associadas. Com este estudo pretende‑se desenvolver um método rápido e de elevada especificidade e sensibilidade que permita identificar as espécies de fungos clinicamente relevantes em contexto de saúde ocupacional. Foi utilizado o Coriolis Air sampler para proceder à recolha de amostras de ar interior (300 Lmin‑1) em seis instalações de criação de aves e suínos. O DNA fúngico foi isolado das amostras utilizando o kit Zymo ZR Fungal/Bacterial DNA e a sua presença foi confirmada utilizando primers universais para fungos. A presença de Aspergillus fumigatus foi pesquisada por PCR em Tempo Real utilizando sondas Taqman e primers específicos. Os resultados obtidos foram comparados com os determinados por métodos convencionais de cultura. Foram obtidas 25 amostras de 300L de ar em seis instalações. Os resultados obtidos confirmam a presença de A. fumigatus em todas as amostras de ar em que esta espécie foi identificada através de culturas (3/25). Adicionalmente, foi também detectada em amostras de ar correspondendo a instalações em que, através de culturas, esta espécie não foi identificada no ar interior (6/25). Os resultados preliminares sugerem maior sensibilidade dos métodos moleculares relativamente aos métodos convencionais de cultura. Futuramente, pretende‑se aplicar a mesma metodologia para identificação de um maior número de espécies e proceder à sua quantificação.
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  • Pesquisa de antigénio HBs e anticorpo HCV: avaliação de dois testes rápidos.
    Publication . Manita Ferreira, Carla; Almeida Santos, João; Lourenço, Teresa; Cortes Martins, Helena
    Objectivo: Avaliar o desempenho de dois testes rápidos, um para detecção do antigénio de superfície do HBV (AgHBs) e outro para detecção de anticorpos para HCV (AcHCV). Metodologia: Os dois testes avaliados (Rapidan® Tester HBsAg e Rapidan® Tester Anti-HCV – Türklab) utilizam como metodologia a imunocromatografia em fase sólida. O estudo incidiu sobre 100 soros, 50 para cada teste, previamente estudadas por ensaio imunoenzimático de micropartículas (Abbott AxSYM® HCV 3.0 e HBsAg v2.0). Como teste confirmatório para AcHCV foi utilizado o método de RIBA (INNO-LIA™ HCV Score). Todos os testes foram executados de acordo com as instruções do fabricante. Resultados: Relativamente à detecção do AgHBs pelo teste rápido, o estudo de 28 soros positivos e 22 negativos, revelou uma sensibilidade de 85.7%, especificidade de 100.0%, valor preditivo positivo (VPP) de 100.0% e valor preditivo negativo (VPN) de 84,6%. Os resultados da sensibilidade e VPN reflectem a ocorrência de quatro resultados falso negativos. Os 50 soros submetidos a ensaio para AcHCV, consistiam em 27 amostras positivas, dos quais 14 com fraca reactividade, e 23 negativas. Na avaliação do teste rápido surgiram três resultados falso negativos, o que se traduziu numa sensibilidade de 88.9%, especificidade de 100.0%, VPP de 100.0% e VPN de 88,5%. Conclusões: Os testes avaliados no presente trabalho, embora pese o número reduzido de amostras estudadas, apresentaram uma especificidade e VPP elevados (100%). A ocorrência de resultados falso negativos em ambos os testes levou a que os valores de sensibilidade e VPN fossem inferiores ao esperado. Os testes rápidos têm um lugar importante no rastreio de diferentes doenças infecciosas, pela sua facilidade de execução e implementação, no entanto, como reflectem os resultados obtidos nesta avaliação, o seu uso deve ser criterioso.
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  • Traditional foods from the Black Sea Area countries: minerals and trace elements content
    Publication . Costa, H.S.; Sanches-Silva, A.; Nascimento, A.C.; Santiago, S.; Trichopoulou, A.; D’Antuono, F.; Alexieva, I.; Bugyna, L.; Fedosova, K.; Hayran, O.; Karpenko, D.; Kilasonia, Z.; Stroia, A.L.; Finglas, P.
    Minerals and trace elements and are essential for biological processes and play a vital role in normal growth and development. Low intake or reduced bioavailability of minerals may lead to deficiencies, which causes impairment of body functions. Due to the unquestionable importance of minerals in human nutrition, sodium (Na), potassium (K), calcium (Ca), magnesium (Mg), iron (Fe), copper (Cu), phosphorous (P), zinc (Zn), manganese (Mn) and selenium (Se) are being determined in traditional foods from Black Sea Area countries, in the frame of the European Project BaSeFood (Sustainable Exploitation of Bioactive Components from the Black Sea Area Traditional Foods). The aim of this study was to produce new analytical data of minerals and trace elements content in traditional foods in order to highlight their potential positive health effects. All minerals and trace elements were analysed by inductively coupled plasma - optical emission spectrometer (ICP-OES) except for selenium which was performed by graphite atomic absorption spectroscopy in the selected traditional foods from Black Sea Area countries. The methods used in this study are accredited methods by ISO/IEC/17025 or successful participation in proficiency testing schemes. Na and K were the most abundant minerals in the selected traditional foods. For sodium the highest level was found in wild plum sauce from Georgia (561 mg/100 g) and in herbal dish from Romania (618 mg/100 g). The highest content in K (937 mg/100 g), Mg (346 mg/100 g), Cu (1.24 mg/100 g), P (681 mg/100 g) and Zn (5.47 mg/100 g) was found in roasted sunflower seeds from Ukraine. With respect to Mn, herbal dish was the sample with the highest content (2.09 mg/100 g) from those already analysed. Ca and Fe presented the highest level in nettles with walnut sauce from Georgia (452 mg/100 g sample and 5.2 mg/100 g, respectively). The analytical results are given per 100 g of edible portion. A great variability was found for the analysed traditional foods from Black Sea Area countries. The samples with highest mineral content were nettles with walnut sauce, halva, roasted sunflower seeds, wild plum sauce and cottage cheese with dill and garlic.
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  • Programa Nacional de Diagnóstico Precoce: Relatório 2010
    Publication . Vaz Osório, Rui; Vilarinho, Laura
    Relatório do Programa Nacional de Diagnóstico Precoce relativo ao ano de 2010. O Programa Nacional de Diagnóstico Precoce tem como objectivo primário, o rastreio neonatal de doenças cujo tratamento precoce permita evitar nas crianças rastreadas, atraso mental, situações de coma e alterações neurológicas ou metabólicas graves e definitivas.
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  • Factores de Risco para sibilância: resultados da Fase1 do Projecto "Ambiente e Saúde em Creches e Infantários" (ENVIRH)
    Publication . Martins, Pedro; Papoila, Ana Luísa; Marques, João; Caires, Iolanda; Martins, José; Pedro, Catarina; Manilha, Maria do Carmo; Cano, Manuela; Silva, Ana Sofia; Aelenei, Daniel; Nogueira, Susana; Paixão, João Paulo; Teixeira, João Paulo; Viegas, João; Rosado-Pinto, José; Leiria-Pinto, Paula; Neuparth, Nuno
    Muitas crianças com idade inferior a 6 anos apresentam sibilância no decurso de infecções respiratórias. O projecto ENVIRH tem como parte integrante dos seus objectivos identificar factores de risco para sibilância relacionados com as características construtivas / qualidade do ar interior das creches e infantários. Métodos: No âmbito do Projecto ENVIRH foram seleccionadas aleatoriamente 46 Instituições Particulares de Solidariedade Social (IPSS) das cidades de Lisboa e Porto, estratificadas por freguesia e número de alunos. As escolas seleccionadas corresponderam a metade das IPSS destas duas cidades. Em Outubro de 2010 foi entregue aos pais de todas as crianças uma versão resumida do questionário do estudo ISAAC (n=5161). Efectuou-se no mesmo período uma avaliação sumária das características construtivas e da qualidade do ar de todas as escolas participantes. Para a análise dos dados foram utilizadas Equações de Estimação Generalizadas (GEE), de forma considerar a estrutura de correlação dos indivíduos de cada IPSS. Resultados: Foram devolvidos 3185 questionários. A idade média foi de 3.1 ± 1.5 anos, sendo 50.5% do sexo masculino. A prevalência reportada de sibilância nos 12 meses anteriores foi de 27.5% (IC 95%: 25.9% - 29.0%). Das diversas varáveis consideradas - idade, sexo, escolaridade dos pais, tabagismo passivo, existência de irmãos mais velhos, antecedentes de eczema na criança, antecedentes de asma ou rinite nos pais, idade e área da IPSS, número de alunos, existência de bolores na instituição, temperatura, humidade relativa e concentração de CO2 médias do ar interior durante o período de ocupação - somente persistiram significativas na análise multivariável (p<0.05) a idade (OR: 0.74; IC 95: 0.70 - 0.78; p<0.001), antecedentes de eczema (OR: 1.35; IC 95: 1.14 - 1.60; p<0.001), e antecedentes de asma ou rinite nos pais (OR: 1.99; IC 95: 1.67 - 2.38; p<0.001). Um aumento médio de 100 ppm de CO2 também se associou com sibilância nos 12 meses anteriores (OR: 1.02; IC 95: 1.01 - 1.03; p=0.008). Conclusão: Tratando-se a concentração de CO2 um marcador indirecto da ventilação e da qualidade do ar interior, os resultados alcançados sugerem a necessidade de introduzir melhorias nestes parâmetros, ao nível das creches e infantários, dado existir uma associação muito significativa das concentrações de CO2 com sibilância.
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