Browsing by Author "Copeto, Sandra"
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- Acrilamida em cereais e derivados: validação do método analítico e resultados preliminaresPublication . Copeto, Sandra; Jesus, Susana; Delgado, Inês; Coelho, InêsA reação de Maillard, responsável pela cor, sabor e aroma dos alimentos, também produz substâncias nocivas, como a acrilamida (AA). Esta amida insaturada forma-se quando alimentos ricos em hidratos de carbono, como pão, batatas e café, são cozinhados a temperaturas elevadas e humidade baixa. A União Europeia classificou a AA como carcinogénica (Categoria 1B), mutagénica (Categoria 1B) e tóxica para a reprodução (Categoria 2). O presente estudo visa validar um método para determinar AA em cereais e derivados e investigar a sua presença em diferentes variedades desses produtos. Utilizou-se a cromatografia líquida de ultra eficiência acoplada a um detetor de massa (UPLC-MS/MS) com ionização por electrospray positiva (ESI+ ) para detetar e quantificar a AA. O desempenho do método foi validado utilizando testes de avaliação externa da qualidade internacionais como testes de proficiência (FAPAS) e material de referência certificado (ERM-BD272). Avaliaram-se parâmetros como linearidade, limite de deteção (LD), limite de quantificação (LQ), precisão, exatidão e incerteza. Os LD e LQ foram de 0,40 µg/L e 1,22 µg/L, respetivamente, em conformidade com o Regulamento (UE) 2017/2158. A curva de calibração mostrou linearidade (R2 > 0,995). O método apresentou boas taxas de recuperação (92%-105%) e de precisão (desvio padrão relativo (RSD) ≤ 13%), participação satisfatória em ensaios de comparação interlaboratorial (ECI) (Z-score: 0,69 para Crispbread e -0,93 para Biscuit), assim como bons resultados para o ERM-BD272, demonstrando que o método é adequado para a determinação de AA em cereais e derivados. O método foi aplicado a cereais e derivados existentes no mercado, incluindo bolacha Maria, pão de trigo, flocos de milho e bolachas para bebé, todos recolhidos em Lisboa, Portugal. Os resultados de AA das amostras avaliadas, expressos em µg/kg, encontram-se abaixo dos valores legislados pelo Regulamento (EU) 2017/2158. Embora os níveis de acrilamida encontrados cumpram os limites estabelecidos pela União Europeia, é necessária uma monitorização contínua da sua ocorrência, considerando as incertezas ainda presentes sobre os efeitos a longo prazo deste contaminante.
- Alfa-talassémia delecional e fenótipo hematológico: parâmetros associados às diferentes deleções na casuística de 2015 a 2019Publication . Gaspar, Gisela; Ramalho, Rita de Mira; Seuanes, Filomena; Feliciano, Carla; Duarte, Guida; Copeto, Sandra; Costa, Alcina; Santos, João Xavier; Miranda, ArmandinaAs talassémias são caracterizadas por um desequilíbrio quantitativo nas cadeias globinicas devido à redução ou supressão da síntese de uma das cadeias. Foram avaliados retrospetivamente os resultados de 496 casos suspeitos de α-talassémia delecional e correlacionados com os dados hematológicos. A pesquisa de deleções causadoras de α-talassémia foi efetuada por Gap e Multiplex Gap-PCR. A maioria dos casos (n=190) apresentou um genótipo normal (αα /αα), seguido de heterozigotia (-α 3 ,7 /αα) (n=148) e homozigotia (-α 3 ,7 /α 3 ,7 ) (n=141) para a deleção de 3,7kb. Detetaram-se ainda 5 casos de heterozigotia para a deleção de 4,2Kb (-α 4,2 /αα), 4 de dupla heterozigotia ( α 3 ,7 /α 4,2 ), 7 de heterozigotia α 0 (-- S E A /αα ), e 1 de Hb H (-- S E A /-α 3 ,7 ). Os resultados evidenciaram que o VGM e o HGM são excelentes índices hematológicos de rastreio e seleção dos testes moleculares, sendo o seu valor tanto mais baixo quanto maior o número de genes delecionados. Os resultados obtidos são ainda concordantes com o descrito na literatura e reforçam que o valor de cut-off de 25 pg (HGM), tem sensibilidade adequada para inferir da presença de uma deleção α 0 -talassémia. A deteção da deleção α 0 assume particular importância na prevenção da ocorrência de Hb Bart’s na descendência de um casal de portadores. O diagnóstico de α-talassémia é efetuado por métodos moleculares, no entanto os índices hematológicos são importantes marcadores preditivos do número de genes alfa delecionados e da relação fenótipo / genótipo.
- Avaliação da concentração de iodo urinário em crianças em idade escolar (6 aos 12 anos) em Cabo VerdePublication . Delgado, Inês; Ventura, Marta; Rego, Andreia; Copeto, Sandra; Ribeiro, Ailton; Lima, Maria da Luz Mendonça; Spencer, Irina Monteiro; Trigueiros, Dulcineia; Coelho, InêsO Instituto Nacional de Saúde Doutor Ricardo Jorge (INSA) e o Instituto Nacional de Saúde Pública de Cabo Verde (INSP) estabeleceram um protocolo de colaboração para realizarem a avaliação e monitorização do iodo urinário em crianças de Cabo Verde. Assim, o INSP selecionou crianças das nove ilhas habitadas (Santo Antão, São Vicente, São Nicolau, Sal, Boa Vista, Maio, Santiago, Fogo e Brava) e realizou a recolha de amostras de urina de 24 horas de 541 crianças dos 6 aos 12 anos, que posteriormente foram enviadas para o INSA para determinação do teor de iodo por espectrometria de massa com plasma indutivo acoplado (ICP-MS). Os resultados revelaram uma mediana de 155 μg/L nas iodúrias da população em estudo e um aporte de iodo considerado adequado para apenas 36 % das crianças. É necessária especial atenção para a existência de muitos casos de excesso de iodo nas ilhas de Santo Antão, São Nicolau e Sal e casos de deficiência nas ilhas de São Vicente, Boa Vista e Fogo. Este estudo revelou a importância da monitorização da implementação de políticas públicas direcionadas para a correção de situações consideradas inadequadas para uma vida mais saudável em termos da ingestão de iodo.
- Avaliação dos Resultados do PNAEQ na Quantificação da HbA2Publication . Vilhena, Filipa; Correia, Helena; Cardoso, Ana; Seuanes, Filomena; Copeto, Sandra; Costa, Sandra; Miranda, Armandina; Faria, Ana PaulaA melhoria contínua constitui um dos objetivos principais do laboratório clínico. Devem ser utilizadas metodologias de controlo de qualidade interno e participação em programas de Avaliação Externa da Qualidade, que permitam identificar, prevenir e corrigir possíveis erros. A Avaliação Externa da Qualidade (AEQ) tem como objetivo avaliar o desempenho do laboratório clínico comparativamente a outros laboratórios contribuindo para a harmonização dos resultados. Nos portadores de -Talassemia, caracterizados pela diminuição da síntese de cadeias do tipo ß da hemoglobina A, a correta quantificação da Hb A2 é essencial no seu diagnóstico laboratorial.
- Controlo da qualidade interno e avaliação externa da qualidade para a quantificação da HbA2Publication . Vilhena, Filipa; Seuanes, Filomena; Copeto, Sandra; Costa, Sandra; Correia, Helena; Cardoso, Ana; Miranda, Armandina; Faria, Ana PaulaAs hemoglobinopatias são doenças monogénicas de transmissão autossómica recessiva, causadas por mutações nos genes que codificam para as cadeias globinícas, ou nas suas regiões regulatórias. Podem conduzir à síntese reduzida da hemoglobina (Hb) (talassémias) ou à formação de Hb estruturalmente anómalas (variantes). Em Portugal, a percentagem de portadores de hemoglobinopatias na população em geral varia entre 0,5 e 2,0%1. A quantificação da Hb A2 é essencial na deteção de portadores de β-talassémia, sendo muito importante na prevenção do aparecimento de formas graves de hemoglobinopatias. A deteção de portadores de β-talassémia é facilmente realizada nos fenótipos clássicos caracterizados por aumento da Hb A2 (4-6%) e diminuição dos índices eritrocitários (VGM e HGM). No entanto, devido à proximidade entre os valores de Hb A2 normais e patológicos, e aos fenótipos atípicos, com índices eritrocitários próximos do normal e valores de Hb A2 borderline (3,3-3,8%) é muito importante determinações com alto grau de reprodutibilidade e exatidão 2,3. O Controlo de Qualidade Laboratorial através do Controlo de Qualidade Interno (CQI) e da participação em programas de Avaliação Externa da Qualidade (AEQ), permite avaliar e melhorar os níveis de precisão e exatidão analítica, possibilitando a longo termo, uma avaliação retrospetiva do desempenho do laboratório, demonstrando a sua competência relativamente aos seus pares. Objetivo: Análise dos resultados do CQI e da AEQ (PNAEQ-Portugal e NEQAS-Reino Unido), da quantificação da Hb A2 pela metodologia de HPLC, do laboratório de hemoglobinopatias do INSA, no período de 2011 a 2014.
- Controlo da qualidade interno e avaliação externa da qualidade para a quantificação da HbA2Publication . Vilhena, Filipa; Seuanes, Filomena; Copeto, Sandra; Costa, Sandra; Correia, Helena; Cardoso, Ana; Miranda, Armandina; Faria, Ana PaulaAs hemoglobinopatias são doenças monogénicas de transmissão autossómica recessiva, causadas por mutações nos genes que codificam para as cadeias globínicas, ou nas suas regiões regulatórias. Podem conduzir à síntese reduzida da hemoglobina (Hb) (talassemias) ou à formação de hemoglobinas estruturalmente anómalas (variantes). Em Portugal, a percentagem de portadores de hemoglobinopatias na população em geral varia entre 0,5 e 2,0%1. A quantificação da Hb A2 é essencial na deteção de portadores de β-talassemia, sendo muito importante na prevenção do aparecimento de formas graves de hemoglobinopatias. A deteção de portadores de β-talassemia é facilmente realizada nos fenótipos clássicos caracterizados por aumento da Hb A2 (4-6%) e diminuição dos índices eritrocitários (VGM e HGM). No entanto, devido à proximidade entre os valores de Hb A2 normais e patológicos, e aos fenótipos atípicos, com índices eritrocitários próximos do normal e valores de Hb A2 borderline (3,3-3,8%), é muito importante determinações com alto grau de reprodutibilidade e exatidão 2,3. O Controlo da Qualidade Laboratorial através do Controlo da Qualidade Interno (CQI) e da participação em programas de Avaliação Externa da Qualidade (AEQ), permite avaliar e melhorar os níveis de precisão e exatidão analítica, possibilitando a longo termo, uma avaliação retrospetiva do desempenho do laboratório, demonstrando a sua competência relativamente aos seus pares.
- Deletional alpha-thalassemia and hematological phenotype: predictive parameters of different deletionsPublication . Gaspar, Gisela; Ramalho, Rita de Mira; Seuanes, Filomena; Feliciano, Carla; Duarte, Guida; Copeto, Sandra; Costa, Alcina; Santos, João Xavier; Miranda, ArmandinaIntroduction: Thalassemias are characterized by a quantitative imbalance of the globin chains due to the reduction or suppression of the synthesis of one of the globin chains.The hematological tests usually used as indicative for the investigation of α-thalassemia are the blood count with MCV (Mean Cell Volume) < 80 fL and/or MCH (Mean Cell Hemoglobin) < 27 pg and normal Hb A2 (< 3.5%). Aim: This study aimed to correlate the different deletional α-thalassemia genetic alterations with the corresponding hematological phenotype, based on casuistry from 2015 to 2019. Methodology: Was evaluated retrospectively 496 cases suspected of deletional α-thalassemia from 2015 to 2019 and correlated them with the hematological data available. We searched for α-thalassemia deletions by Gap-PCR and Multiplex Gap-PCR. Haematological evaluation was carried out by the erythrogram, Hb isoelectric focusing and quantification of Hb A2 and Hb F (Ion exchange high performance liquid chromatography). The statistical analysis of the results was carried out through calculating the mean, standard deviation, median, and t-Student test, with a significance level of 0.05. Results and discussion: Most patients (n=190) had a normal genotype (αα/αα), followed by heterozygosity (-α3.7/αα) (n=148) and homozygosity (-α3.7/α3.7) (n=141) for the 3.7kb deletion. We also detected 5 cases of heterozygosity for the 4.2Kb deletion (-α4.2/αα), 4 of double heterozygosity (α3.7/α4.2), 7 heterozygosity α0 (--SEA /αα) and 1 of HbH (--SEA/-α3.7). The results showed that the MCV and the MCH are excellent hematological indices for screening and selection of patients for molecular testing (their value being the lower the greater the number of deleted genes). Our results are in line with those described in the literature and reinforce that the cut-off value of 25 pg (MCH) is sensitive enough to infer the presence of α0 -thalassemia deletion. The detection of the α0 deletion is very important in preventing the occurrence of Hb Bart's in the offspring of a carrier couple. The diagnosis of deletional α-thalassemia is realised by genetic testing, however hematological indices are relevant predictive markers of the number of deleted alpha genes and the phenotype /genotype correlation.
- Hemoglobin variants with electrophoretic mobility similar to hemoglobin SPublication . Miranda, Armandina; Faustino, Paula; Gonçalves, João; Seuanes, Filomena; Copeto, Sandra; Loureiro, Pedro; Costa, Alcina; Costa, Sandra; Seixas, Maria TeresaHemoglobinopathies are among the most common inherited diseases around the world and are one of the world’s major health problems. They are monogenic diseases of autosomal recessive transmission resulting from mutations affecting the genes responsible for the synthesis of globin chains. Abnormal hemoglobins (Hb), named Hb variants, are caused by structural defects resulting from an altered amino acid sequence in globin chains, being Hb S the more frequent and pathogenic/disease associated. The aim of this work was to identify and characterize Hb variants with mobility similar to Hb S when using common laboratorial methodologies, such as isoelectric focusing and high pressure ion exchange chromatography (HPLC). Hemoglobin analysis was performed by isoelectric focusing and HPLC. Globin chain variants were classified in alpha or beta type by reversed phase high performance chromatography. Hb S was confirmed by the solubility test. In order to identify the rare Hb variants, molecular analyses were performed in patient’s DNA. From 2010 to 2016, in the routine practice of our laboratory, 601 cases of variants of Hb were detected with mobility Hb S-like. Amongst them, 433 were confirmed as being Hb S (72.0%). Others hemoglobins also with clinical relevance, Hb D and Hb Lepore, were prevalent, 90 (15.0%) and 61 (10.2%), respectively. The remaining 17 cases were classified as rare (2.8%) and 10 of them were identified by molecular studies as: Hb Maputo (1), Hb G-Coushata (1), Hb Summer Hill (1), Hb Setif (1), Hb G Waimanalo (1), Hb D Iran (1) Hb Oleander (1), Hb Ottawa (1), Hb Etobicoque (1) and Hb Matsue-Oki (1). Hb Matsue-Oki was found in compound heterozygosity with the –α3.7kb-thalassemia deletion. We can conclude that combining the results obtained by the different biochemical methodologies allow the presumptive identification of the more prevalent variants, namely Hb S, Hb D and Hb Lepore, and direct the molecular study for the definitive identification. This study also revealed that several rare variants have similar mobility as Hb S and, consequently, some safety measures should be applied in order to achieve their accurate identification. A correct laboratorial diagnosis is essential for proper patient’s clinical management and genetic counselling.
- Hemoglobinas variantes com mobilidade eletroforética semelhante à da Hemoglobina SPublication . Miranda, Armandina; Seuanes, Filomena; Copeto, Sandra; Loureiro, Pedro; Costa, Alcina; Costa, Sandra; Seixas, Maria Teresa; Gonçalves, João; Gonçalves, João; Faustino, PaulaAs hemoglobinopatias são doenças monogénicas hereditárias, de transmissão autossómica recessiva, resultantes de mutações nos genes codificantes para as cadeias de globina da hemoglobina (Hb), ou nas suas regiões regulatórias. Encontram-se entre as doenças hereditárias mais comuns e constituem um dos principais problemas de saúde a nível mundial.
- Hemoglobinas variantes com mobilidade eletroforética semelhante à da Hemoglobina SPublication . Miranda, Armandina; Seuanes, Filomena; Copeto, Sandra; Loureiro, Pedro; Costa, Alcina; Costa, Sandra; Seixas, Maria Teresa; Gonçalves, João; Faustino, PaulaIntrodução: As hemoglobinopatias são doenças monogénicas hereditárias, de transmissão autossómica recessiva, resultantes de mutações nos genes codificantes para as cadeias de globina da hemoglobina (Hb), ou nas suas regiões regulatórias. Encontram-se entre as doenças hereditárias mais comuns e constituem um dos principais problemas de saúde a nível mundial. As variantes das hemoglobinas são causadas por defeitos estruturais resultantes de alterações na sequência de aminoácidos nas cadeias de globina, sendo a Hb S a mais frequente e associada a patologia. As hemoglobinopatias são as únicas, entre todas as doenças genéticas, em que a deteção de portadores é possível por testes hematológicos e bioquímicos. No entanto, a análise molecular do respetivo gene, deve ser realizada para a identificação definitiva de casos complexos ou quando os resultados hematológicos/bioquímicos não são conclusivos. A identificação de hemoglobinopatias é frequentemente presuntiva, com base em tempos de retenção e padrões de migração, e deve ser baseada preferencialmente no mínimo em duas metodologias com princípios de separação diferentes. A identificação definitiva requer a análise do respetivo gene, espectrometria de massa ou sequenciação de proteínas 1, 2 .Os procedimentos analíticos mais comumente utilizados devem ter capacidade de detetar as variantes de hemoglobina clinicamente mais significativas: Hb S, Hb C, Hb D Punjab, Hb Lepore , Hb E e Hb OArab. .Objetivo: Caraterizar e identificar as variantes de Hb com mobilidade eletroforética semelhante à Hb S..