DGH - Apresentações orais em encontros nacionais
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- Nanotoxicologia e NanosegurançaPublication . Louro, HenriquetaSobre avaliação de riscos dos nanomateriais.
- Avaliação da Segurança de Nanomateriais de Celulose InovadoresPublication . Vital, Nádia; Silva, Maria João; Kranendonk, M.; Louro, HenriquetaIntrodução: Na sociedade atual verifica-se uma preocupação acrescida com a exposição humana a materiais que, embora previamente considerados seguros, poderão revelar-se perigosos para a saúde quando usados à nanoescala. Este poderá ser o caso dos nanomateriais de celulose (CNMs), produzidos de fontes naturais, explorados para diversas aplicações, em particular na indústria alimentar. Podem ser usados como aditivos alimentares (e.g. estabilizadores ou espessantes), fonte de fibra não calórica, ou em embalagens alimentares(1). Antecipa-se um aumento da exposição humana, por ingestão de alimentos contendo CNMs, contaminados através das embalagens alimentares ou por acumulação no ambiente(1). Porém, o conhecimento sobre a sua segurança, em particular os seus efeitos no trato gastrointestinal (GIT), permanece limitado(1). É imperativo estudar os seus potenciais efeitos no organismo após ingestão oral, antes da sua colocação no mercado, avaliando a sua segurança com base nas recomendações da Autoridade Europeia para a Segurança Alimentar(2). Objetivos: Este trabalho visou investigar os potenciais efeitos de dois CNMs no GIT, através da avaliação de potenciais efeitos citotóxicos e genotóxicos em dois modelos celulares intestinais humanos (Caco-2 e HT29-MTX-E12). Metodologia: Estudaram-se duas celuloses micro/nanofibriladas (CNFs) inovadoras, produzidas a partir de polpa kraft branqueada industrial de Eucalyptus globulus. A citotoxicidade foi avaliada pelos ensaios MTT e clonogénico, enquanto a genotoxicidade foi analisada pelos ensaios do micronúcleo e do cometa. Resultados: Não se observou efeitos citotóxicos após exposição aos CNFs nas concentrações testadas, independentemente da linha celular utilizada. Também, não se observaram alterações cromossómicas nas duas linhas celulares expostas a cada CNFs através do ensaio do micronúcleo. Porém, os resultados do ensaio do cometa revelaram a indução de quebras no DNA das células HT29-MTX-E12, após 3h e 24h de exposição para as duas CNFs. Esse efeito foi inconsistente nas células Caco-2 após um tratamento semelhantes com as mesmas amostras. Conclusões: Os resultados obtidos suscitam preocupação sobre a segurança destas CNMs, pois observou-se um efeito genotóxico que deverá continuar a ser investigado, através de testes complementares. Destaca-se a importância de investigar os efeitos genotóxicos, associados a um potencial efeito carcinogénico, para além de uma simples análise da sua citotoxicidade, como é frequentemente utilizada para afirmar a biocompatibilidade de CNMs. Assim, deverá promover-se novas metodologias de produção, uma maior purificação ou uma alteração das propriedades físico-químicas destas CNFs, para reduzir a sua toxicidade, prevenindo, assim, eventuais efeitos nefastos na saúde humana. Referências: 1. Vital N, Ventura C, Kranendonk M, Silva MJ, Louro H. Toxicological Assessment of Cellulose Nanomaterials: Oral Exposure. Nanomaterials [Internet]. 2022 Sep 27; 12(19): 3375 2. EFSA Scientific Committee. Guidance on risk assessment of nanomaterials to be applied in the food and feed chain: human and animal health. EFSA Journal [Internet]. 2021 Aug 3; 19(8):6768
- Normalização em Nanotecnologias SC1 – Terminologia e NomenclaturaPublication . Vital, NádiaDefinição e desenvolvimento de terminologia e nomenclatura inequívoca e uniforme no domínio das nanotecnologias, para facilitar a comunicação e promover o entendimento comum, entre as organizações e os indivíduos na indústria e aqueles que com eles interagem.
- Effects of TiO2 Nanoparticles on the Genome-Wide Methylation of Human Epithelial Intestinal CellsPublication . Valente, Ana; Vieira, Luís; Silva, Catarina; Louro, Henriqueta; Silva, Maria João; Ventura, CéliaIntroduction: Titanium dioxide nanoparticles (TiO2NP) have multiple applications in industry (e.g., engineering, cosmetics, food additives), and biomedicine (e.g., targeted drug delivery and biosensing). Food-grade TiO2 (E171) is applied as a food additive to whiten and improve the opacity of food products, while also having the ability to enhance its flavour. In 2021, EU member states banned E171 from all food products, since there is doubts about its genotoxicity. Nevertheless, the ingestion of TiO2NPs may still occur through to other sources, such as contaminated food or water, consumer products (e.g., toothpaste and lipstick) or pharmaceutics. To date, there is some in vitro evidence that TiO2NP may induce changes in DNA methylation. However, very few studies were performed, and none used genome-wide approaches to identify possible differentially methylated genes induced by TiO2NP exposure, and its impact on molecular pathways. Methodology: Caco-2 epithelial intestinal cells were exposed to 14 μg/ml of anatase, rutile or brookite phase TiO2NP for 24h. Genomic DNA was extracted from exposed and non-exposed cells. DNA libraries were generated using the Premium Reduced Representative Bisulfite Sequencing (RRBS) kit (Diagenode) and sequenced on the NextSeq 550 system (Illumina) using 100 bp paired reads. The Galaxy platform was used for read treatment and mapping, methylation calling and assessing of differentially methylated regions between exposed and non-exposed cells. Pathway analysis was performed using Reactome, and gene ontology analysis with the ClueGO plugin in Cytoscape. Results: Significant differential methylation (p ≤ 0.05) of 92 genes (21 hyper- and 71 hypo-methylated), 70 genes (12 hyper- and 58 hypo-methylated) and 88 genes (21 hyper- and 67 hypo-methylated) was observed for the anatase, rutile and brookite phase TiO2NP, respectively. Functional pathway analysis of these methylation changes identified several relevant cellular pathways that may be altered by exposure, such as G alpha signalling events, being some associated to colon cancer. Conclusions: All types of TiO2NP induce changes in genome methylation of intestinal cells, which may affect cell proliferation, differentiation and survival. Moreover, although some dysfunctional pathways are shared between the three TiO2NP, many are type-specific, suggesting different molecular mechanisms of action for each TiO2NP.
- Regulation of Δ160p53: a p53 short isoform with oncogenic functionsPublication . Ramalho, Ana Catarinap53 is a transcription factor that activates tumor suppressor genes in response to various cellular stresses.
- Translational Regulation of the Human PERK by Upstream Open Reading FramesPublication . Fernandes, Rafael; Rodrigues, Rosário; Lopes, Pedro; Romão, LuísaUpstream open reading frames (uORFs) are cis-acting elements located within the 5’ leader sequence (5’UTR) of transcripts, which can regulate translation of the correspondent main open reading frame (mORF). During endoplasmic reticulum (ER) stress, the accumulation of unfolded proteins activates the ER-resident PKR-like ER kinase (PERK), which results in phosphorylation of eIF2α to inhibit global mRNA translation, while allowing the selective uORF-mediated translation of downstream effectors responsible for stress resolution or, ultimately, cell death. The dual role of PERK in regulating cell fate was implicated in human diseases, like diabetes, neurodegenerative disorders and cancer. Moreover, mutations in the EIF2AK3 gene (encoding PERK) were associated with the rare genetic disease, Wolcott-Rallison Syndrome (WRS). In this work, we aimed to study the translational regulatory role of 5 AUG- and 3 non-AUG-uORFs identified in the PERK 5’UTR and assess its biological relevance. While uORF2 and the non-AUG-uORFs 5, 6 and 7 (numbered according to their distance to the 5’ end of the mRNA) do not seem to have a regulatory role, uORF1, uORF3, uORF4 and uORF8 together present a strong repressive effect over mORF translation in basal conditions. Also, we observe that uORF1 is frequently translated allowing low levels of translation re-initiation at the main ORF. Curiously, we found that when PERK is overexpressed, it leads to the spontaneous activation of a portion of PERK in the absence of any stress stimulus, possibly highlighting the biological relevance of its uORF-mediated translational regulation. Conversely, during ER stress, increased bypass of uORF1 results in a modest degree of translational de-repression, which may help to counterbalance the increased rate of PERK protein turnover observed in these conditions. We also observed that alteration of the PERK uORFs by mutations found in WRS patients modify mORF expression, providing a possible link to the disease. Altogether, we highlight the importance of including 5’UTRs in the screening of disease-related mutations and the necessity of functional studies to assess their role in pathogenesis.
- Tratamento com Hidroxiureia em crianças com Anemia de Células Falciformes em Angola: caracterização da coorte, evolução clínica e laboratorialPublication . Santos, Brígida; Miranda, Armandina; Ginete, Catarina; Arez, Ana Paula; Faustino, Paula; Brito, MiguelIntrodução: A Anemia de Células Falciformes (ACF) é uma doença genética causada pela mutação na cadeia beta globina c.20 A>T dando origem à hemoglobina S. As manifestações clínicas decorrem de fenómenos vaso-oclusivos e da hemólise crónica. Apesar de ser uma doença monogênica tem múltiplas expressões fenotípicas inter-pacientes. A hemoglobina fetal (HbF) é o modificador central da doença e é passível de manipulação terapêutica. A Hidroxiureia (HU) é um fármaco aprovado para indução de HbF em pacientes com ACF. Contudo, alguns estudos mostraram que as respostas individuais ao tratamento com HU são muito variáveis. O objectivo deste estudo é caracterizar uma coorte de crianças angolanas com ACF bem como avaliar a variação clínica e laboratorial durante o tratamento com HU. Métodos: Foram seleccionadas crianças dos 3 aos 12 anos de idade, com o diagnóstico de ACF seguidas em dois hospitais em Angola. Houve duas fases de seguimento: pré-HU e a segunda em que os pacientes iniciaram a toma da HU na dose de 20mg/kg/dia. Resultados: Foram incluídos 215 pacientes, a idade média foi de 6,69 anos. À entrada no estudo 26 (12%) pacientes apresentavam da doença. De acordo à concentração da HbF basal, houve significância estatística (p˂0,05) entre os grupos etários à entrada no estudo, na idade da primeira manifestação da doença, no número de internamentos e de transfusões e entre classes de gravidade da anemia. Houve 73 (33,9%) perdas dos quais 5 por óbito. Do total, 157 pacientes iniciaram a toma da HU e destes 141 completaram os 12 meses de medicação propostos no estudo. Quatro pacientes desenvolveram complicações da doença durante a fase de medicação. A toxicidade hematológica ocorreu em 34 (21,6%) pacientes.A HU teve impacto na redução de eventos clínicos (212 vs 127), aumento da Hb total (7,39±0,98 vs 7,9 ±0,95), VGM (77,25±8,43 vs 84,88±8,99) e HGM (25,46±2,95 vs 28,82±3,48); redução dos leucócitos (13,71±4,6 vs 9,98±2,98), neutrófilos (5,81±2,29 vs 4,17±1,34), plaquetas (437,67±173,50 vs 409,27±123,33), reticulócitos (10,24±4,63 vs 6,87±2,86) e bilirrubina total (1,31±1,34 vs 1,11±0,75). A variação média da HbF pré e pós HU foi 5,81±3,87 vs 11,91±6,10. A correlação da variação da HbF com os outros parâmetros laboratoriais permitiu classificar os pacientes em respondedores 81 (57%), respondedores inadequados 55(38,7%) e pacientes não aderentes 6 (4,2%). Conclusão: A HU teve benefícios clínicos. A resposta laboratorial foi variada podendo estar relacionada ao incumprimento terapêutico ou à presença de polimorfismos em genes que regulam a expressão da HbF.
- Exposição Humana a Micotoxinas: biomonitorização humana e contribuição para a avaliação de risco da população europeiaPublication . Alvito, Paula; Silva, Maria JoaoAs populações estão expostas diariamente a uma mistura complexa de substâncias químicas maioritariamente através da alimentação. Por forma a avaliar a exposição humana a estes contaminantes, é importante efetuar a sua biomonitorização, isto é, detetar a sua presença diretamente em amostras biológicas como sangue, cabelo, urina ou leite materno, ou prever precocemente os seus efeitos no organismo, com vista a reduzir a exposição aos químicos e contribuir para melhorar a saúde pública. A Iniciativa HBM4EU (European Human Biomonitoring Iniciative) é um consórcio europeu que conta com a participação de 30 países, da Agência Europeia do Ambiente e da Comissão Europeia, e tem por objetivo utilizar a biomonitorização humana para avaliar a exposição humana a substâncias químicas, com vista a uma melhor compreensão dos impactos associados na saúde e à melhoria da avaliação dos riscos químicos. Um dos contaminantes químicos estudados neste projeto europeu são as micotoxinas, compostos naturais produzidos por fungos e presentes maioritariamente em alimentos.
- Exposição ambiental e ocupacional da população portuguesa a metais e seus determinantesPublication . Namorado, Sónia; Silva, Maria JoãoA União Europeia reconheceu o papel relevante da biomonitorização humana (BMH) na geração do conhecimento para a avaliação dos efeitos cumulativos da exposição a químicos, tendo em conta as várias vias e fontes de exposição e, neste sentido, cofinanciou a Iniciativa Europeia de Biomonitorização Humana (2017-2022), projeto que envolveu 116 instituições de 30 países e teve como objetivo utilizar a biomonitorização humana para avaliar a exposição humana a substâncias químicas, com vista a uma melhor compreensão dos impactos associados na saúde e à melhoria da avaliação dos riscos químicos. No âmbito desta iniciativa, Portugal participou no estudo realizado para avaliação da exposição da população geral a químicos selecionados como prioritários (Estudos Alinhados do HBM4EU), entre os quais o cádmio, e no estudo ocupacional para avaliação da exposição a crómio hexavalente. Nesta comunicação serão apresentados os resultados portugueses, nomeadamente dados da exposição a cádmio na população geral e da exposição a crómio em trabalhadores.
- Avaliação da exposição da população portuguesa a substâncias químicas: resultados de um estudo de âmbito nacionalPublication . Namorado, Sónia; Ogura, Joana; Silva, Susana; Coelho, Inês; Delgado, Inês; Gueifão, Sandra; Ventura, Marta; Martins, Carla; Viegas, Susana; Alvito, Paula; Silva, Maria João; Nunes, Baltazar; Matias Dias, CarlosIntrodução: Tem sido amplamente reconhecido que a exposição humana a determinados químicos tem um impacto negativo na saúde humana. Importa, pois, caracterizar e monitorização a exposição da população por forma a, se necessário, suportar o desenvolvimento de medidas que levem à redução dessa exposição. Objetivo: Caracterizar a exposição da população adulta portuguesa a um conjunto de substâncias químicas consideradas prioritárias no âmbito da Iniciativa Europeia de Biomonitorização Humana (HBM4EU). Metodologia: Em 2019-2020 realizou-se um estudo epidemiológico transversal (INSEF-ExpoQuim) numa subamostra dos participantes do Inquérito Nacional de Saúde com Exame Físico (INSEF 2015). Para tal, selecionaram-se indivíduos de ambos os sexos e entre os 28 e 39 anos que foram recontactados. Cada participante respondeu a um questionário para recolha de dados socio-demográficos e estilos de vida e cedeu uma amostra de primeira urina da manhã. As amostras foram analisadas em laboratórios previamente qualificados para determinação de cádmio (Cd), bisfenóis (BPA, BPF e BPS), hidrocarbonetos aromáticos policíclicos (PAHs), acrilamidas e micotoxinas (desoxinivalenol – DON). Foi realizada uma análise descritiva das concentrações dos biomarcadores e uma avaliação do risco para a saúde utilizando a proporção de participantes com valores acima dos valores de referência disponíveis. Resultados: Observaram-se, na população portuguesa (n=296), valores médios das concentrações urinárias de BPA, BPS, acrilamidas e de alguns PAHs, entre os quais o 1-hidroxipireno, superiores aos valores médios observados para a população europeia, enquanto que a média das concentrações de cádmio era inferior. Comparando as concentrações dos biomarcadores analisados com os valores de referência disponíveis observou-se que 1,4%, 0%, 19,3%, 13,7% e 1,0% das concentrações de Cd, BPA, BPS, DON, e 1-hidroxipireno, respetivamente, se encontravam acima dos valores de referência. Conclusões: O INSEF-ExpoQuim produziu pela primeira vez dados de exposição a várias substâncias químicas na população adulta portuguesa harmonizados e diretamente comparáveis com valores de exposição da população Europeia. Os resultados mostraram que a população portuguesa está exposta aos químicos analisados e considerados prioritários no âmbito do HBM4EU, com uma proporção significativa de indivíduos a apresentar valores de exposição a BPS e DON, que poderão ser preocupantes, em termos de saúde pública. Os presentes resultados poderão contribuir para a definição de prioridades nacionais num futuro programa de monitorização e apoiar o desenvolvimento de políticas que visem a redução da exposição a estes químicos.