Browsing by Author "Neiva, Raquel"
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- Biomarcadores nas doenças lisossomais de sobrecarga: o que são e o que nos dizem?Publication . Gaspar, Paulo; Rocha, Hugo; Neiva, Raquel; Azevedo, Olga; Maia, Tabita; Aguiar, Patrício; Cardoso, Teresa; Chaves, Paulo; Alves, Sandra; Vilarinho, LauraAs Doenças Lisossomais de Sobrecarga (DLSs) são um conjunto de patologias raras, crónicas, multissistémicas com modo de apresentação e gravidade muito variáveis. No seu conjunto afetam aproximadamente 1:5000 nados vivos e são causadas pela acumulação de metabolitos não degradados no interior do lisossoma. As esfingolipidoses são o grupo de DLS com maior prevalência e incluem a doença de Gaucher, a doença de Fabry e a doença de Niemann-Pick. Por vezes, parte do produto primário de acumulação, através de uma reação de desacilação, é convertido na respetiva base esfingoide, que se encontra bastante elevada em casos de patologia. Em alguns doentes, estes compostos já se encontram aumentados, mesmo antes do aparecimento dos primeiros sintomas. Os tratamentos disponíveis para estas patologias (terapia de substituição enzimática, terapia de redução de substrato de chaperones farmacológicos) conduzem a um decréscimo da concentração destas bases esfingoides, tornando o doseamento destes compostos útil também para aferir a eficácia da terapêutica utilizada. Pela primeira vez em Portugal, é disponibilizado o estudo destes biomarcadores para as DLSs, através da tecnologia de espectrometria de massa em tandem (MS/MS). Os autores apresentam os resultados obtidos do doseamento destes lisolípidos em diferentes doentes de DLSs, com a clara demonstração da especificidade destes biomarcadores, permitindo um diagnóstico atempado, um melhor conhecimento da evolução da doença e monitorização da eficácia do respetivo tratamento.
- Clinical, biochemical, molecular, and histological features of 65 Portuguese patients with mitochondrial disordersPublication . Cruz, Simão; Taipa, Ricardo; Nogueira, Célia; Pereira, Cristina; Almeida, Lígia S.; Neiva, Raquel; Geraldes, Tiago; Guimarães, António; Pires, Manuel Melo; Vilarinho, LauraIntroduction: Mitochondrial disorders display remarkable genetic and phenotypic heterogeneity. Methods: We performed a retrospective analysis of the clinical, histological, biochemical, and genetic features of 65 patients with molecular diagnoses of mitochondrial disorders. Results: The most common genetic diagnosis was a single large-scale mitochondrial DNA (mtDNA) deletion (41.5%), and the most frequent clinical phenotype was chronic progressive external ophthalmoplegia (CPEO). It occurred in 41.5% of all patients, primarily in those with mtDNA deletions. Histological signs of mitochondrial dysfunction were found in 73.8% of patients, and respiratory chain enzyme assay (RCEA) abnormalities were detected in 51.9%. Conclusions: This study confirms the high relative frequency of single large-scale deletions among mitochondrial disorders as well as its particular association with CPEO. Muscle histology seems to be particularly useful in older patients and those with mtDNA deletions, whereas RCEA might be more helpful in young children or individuals with mtDNA depletion.
- CTNS Molecular Genetics Profile in a Portuguese Cystinosis PopulationPublication . Ferreira, Filipa; Leal, Inês; Sousa, David; Costa, Teresa; Mota, Conceição; Gomes, Ana Marta; Lopes, Daniela; Carmo Macário, Maria do; Tavares, Isabel; Pinto, Helena; Oliveira, João Paulo; Magriço, Rita; Carmona, Célia; Ramos, Sónia; Neiva, Raquel; Marcão, Ana; Vilarinho, LauraBackground: Cystinosis is a multisystemic autosomal recessive deficiency of the lysosomal membrane transporter protein (cystinosin) caused by mutations in CTNS gene. Objective : This study summarizes the Portuguese experience in the diagnosis and management of patients with this rare disease over the past few years and reports recurrent mutations in the CTNS gene . Methods : Unrelated patients from different pediatric and adult hospitals all over Portugal with non-nephrotic proteinuria, hypercalciuria, hypokalemia impaired proximal reabsorption of amino acids, glycosuria and hypophosphatemia, suggestive of a Fanconi syndrome and ocular problems, were studied. Intra-leukocyte cystine levels were determined and molecular analysis was performed, to determine the presence or absence of the 57-kb deletion in CTNS , followed by direct sequencing of the coding exons of CTNS . Results : From 1998 to 2017, twenty-one cystinotic patients were biochemically diagnosed. From the remaining seventeen (four deceased), eleven were studied for CTNS gene. Five out of eleven patients were homozygous for the 57-kb deletion (10/22; 45.5%), and other five were compound heterozygous for this variant (15/22; 68.2%). The other mutations found were p.Q128X (c.721 C>T; 2/22), p.S139F (c.755 C>T; 4/22) and c.18-21delGACT (p.T7FfsX7; 1/22). All of these seventeen cystinotic patients are in treatment. Approximately 84% are adults, 16% are young children, and 54.5% are kidney transplant recipient. Conclusions: The authors would like to emphasize the importance of first screening for the 57-kb deletion since it is very common in our population. This genetic study is the first in our country and it could be the basis for future genetic counseling in Portuguese population.
- Doenças lisossomais de sobrecarga em Portugal: aspetos bioquímicos, genéticos e epidemiológicosPublication . Gaspar, Paulo; Neiva, Raquel; Silva, Lisbeth; Vilarinho, Laura
- Doenças mitocondriais na era da sequenciação de nova geração: estudo de 450 doentesPublication . Nogueira, Célia; Pereira, Cristina; Silva, Lisbeth; Laranjeira, Mateus; Lopes, Altina; Neiva, Raquel; Rodrigues, Esmeralda; Campos, Teresa; Martins, Esmeralda; Bandeira, Anabela; Coelho, Margarida; Magalhães, Marina; Damásio, Joana; Gaspar, Ana; Janeiro, Patrícia; Gomes, Levy; Ferreira, Ana Cristina; Jacinto, Sandra; Vieira, José Pedro; Diogo, Luísa; Santos, Helena; Mendonça, Carla; Vilarinho, LauraAs doenças mitocondriais (DM) são doenças raras, clínica e geneticamente heterogéneas, de difícil diagnóstico, para as quais não existe uma terapia eficaz. O desenvolvimento da tecnologia de sequenciação de nova geração (NGS) revolucionou o diagnóstico molecular deste grupo de doenças, permitindo a identificação de novos genes associados a estas patologias. Nesta nova era genética, através da utilização da tecnologia de NGS, estudamos um grupo de 450 doentes suspeitos de DM, sem etiologia molecular. A nossa estratégia combinada de NGS, englobou a sequenciação de um painel de 213 genes nucleares associados a DM e do DNA mitocondrial completo. Neste estudo, identificamos variantes causais em 134 (30%) doentes analisados, 88 dos quais apresentaram variantes no DNA nuclear e 46 no DNA mitocondrial, tratando-se na maioria de doentes pediátricos (66%). Neste grupo de doentes, identificamos 72 variantes patogénicas descritas na literatura e 20 novas variantes provavelmente patogénicas, assim como 62 variantes de significado indeterminado. Como laboratório nacional de referência para o estudo e investigação das DM, demonstramos o contributo da tecnologia de NGS para esclarecer a etiologia molecular destes doentes, para expandir o espectro mutacional associado a estas patologias e oferecer um diagnóstico pré-natal e aconselhamento genético aos casais em risco.
- Estudos moleculares de Erros Inatos do Metabolismo- Contributo da Unidade de Rastreio Neonatal Metabolismo e Genética no diagnóstico das Doenças RarasPublication . Fonseca, Helena; Sousa, Carmen; Marcão, Ana; Nogueira, Célia; Lopes, Altina; Ferreira, Filipa; Neiva, Raquel; Pereira, Cristina; Almeida, Ligia; Vilarinho, LauraA designação “erros inatos do metabolismo” (EIM) surge pela primeira vez no início do século XX, em 1908, por Archibold Garrod, usando o termo para se referir a algumas situações clínicas. Nos seus estudos sobre a Alcaptonúria, constatou que todos os doentes excretavam grande quantidade de ácido homogentísico na urina e que a transmissão da patologia podia ser explicada recorrendo às leis de Mendel. Mais tarde, postulou que certas doenças surgem devido à ausência de uma enzima que catalisa um passo específico de uma via metabólica, introduzindo assim novos conceitos como via metabólica, bloqueio metabólico e erro inato do metabolismo. A partir destas definições foram feitas várias classificações para os EIM, sendo a mais utilizada a que os divide em três grupos principais: Grupo 1 - Defeito da síntese ou degradação de moléculas complexas, Grupo 2 - Defeito do metabolismo intermediário, Grupo 3 - Defeito na produção ou utilização de energia. As Doenças Hereditárias do Metabolismo (DHM) são doenças raras de natureza genética em que a metabolização de um determinado composto se encontra comprometida. Na sua origem está uma deficiência enzimática específica (envolvida na sintese-anabolismo, ou na degradação- catabolismo de uma substância), uma deficiencia nos transpotadores de proteínas ou de cofatores que afecta uma determinada via metabólica, levando à acumulação de substratos, muitas vezes tóxicos, e à produção diminuída ou nula de um produto biologicamente importante. O défice enzimático é a consequência da existência de mutações num ou vários genes codificantes de proteínas importantes para o passo metabólico em causa. O diagnóstico laboratorial de uma DHM pode portanto ser efectuado a vários níveis, nomeadamente por análise bioquímica de substratos e metabolitos, enzimática e/ou molecular. As DHM individualmente são doenças raras, sendo o diagnóstico bioquímico destas patologias por vezes difícil. Nestes casos o estudo molecular é particularmente útil para a confirmação do diagnóstico e para uma eventual correlação genótipo/fenótipo. Este estudo é também importante para aconselhamento genético e diagnóstico pré-natal. Estão identificados mais de 700 EIM e o seu número aumenta continuamente. Na nossa unidade são 88 as DHM estudadas molecularmente, incluídas nos 3 grupos da classificação dos EIM (defeito da síntese ou degradação de moléculas complexas, defeito do metabolismo intermediário e defeito na produção ou utilização de energia).
- Fenilcetonúria em Portugal: 40 anos de rastreio neonatal (1979-2019)Publication . Ferreira, Filipa; Sousa, Luísa Azevedo Carmen; Neiva, Raquel; Fonseca, Helena; Marcão, Ana; Rocha, Hugo; Carmona, Célia; Ramos, Sónia; Bandeira, Anabela; Martins, Esmeralda; Campos, Teresa; Rodrigues, Esmeralda; Garcia, Paula; Diogo, Luísa; Ferreira, Ana Cristina; Sequeira, Silvia; Silva, Francisco; Rodrigues, Luísa; Gaspar, Ana; Janeiro, Patrícia; Amorim, António; Vilarinho, LauraA fenilcetonúria (PKU) é uma doença genética autossómica recessiva, devido a um erro hereditário do metabolismo dos aminoácidos. A PKU caracteriza-se por um aumento de fenilalanina, em resultado de uma deficiência da enzima hepática, fenilalanina hidroxilase (PAH), uma enzima codificada pelo gene PAH. É uma das 26 patologias integradas no painel das doenças rastreadas em Portugal, a partir de sangue colhido em papel de filtro para o “teste do pezinho”. A deteção precoce da doença tem como objetivo iniciar o tratamento nutricional atempadamente, de modo a prevenir os danos neurológicos nos doentes afetados. Em Portugal, desde 1979 e até ao final de 2019, foram rastreados através do Programa Nacional de Rastreio Neonatal 3 890 677 recém-nascidos. Sendo que, 356 são doentes com PKU e 37 são hiperfenilalaninemias moderadas. A prevalência ao nascimento da PKU e da hiperfenilalaninemia moderada no nosso país é de 1:10.929 e 1:36.123 recém-nascidos, respetivamente. Na Unidade de Rastreio Neonatal, Metabolismo e Genética do Departamento de Genética Humana do INSA foram caracterizados geneticamente 223 doentes. Neste estudo, foram identificadas 56 mutações já descritas na literatura, a maioria compostos heterozigóticos (74% dos doentes). As duas mutações mais prevalentes na população portuguesa são: c.782G>A (p.Arg261Gln), c.1066-10G>A (IVS10-11G>A), seguidas pelas mutações c.1162G>A (p.Val388Met) e c.194T>C (p.Ile65Thr). Este estudo revelou uma elevada heterogeneidade quer do ponto vista do fenótipo bioquímico quer ao nível molecular, o que poderá ser importante na resposta ao tratamento destes doentes uma vez que esta estará dependente do respetivo genótipo. Os dados deste estudo, contribuem para uma melhor compreensão e conhecimento epidemiológico da PKU em Portugal.
- Identification of newborns with galactosemia based on altered amino acids profile in the metabolic newborn screeningPublication . Marcão, Ana; Carvalho, Ivone; Sousa, Carmen; Fonseca, Helena; Rocha, Hugo; Lopes, Lurdes; Neiva, Raquel; Vilarinho, LauraClassic galactosemia (CG) is an autosomal recessive disorder caused by deficient activity of galactose-1-phosphate uridyltransferase (GALT). Clinically, this pathology presents in the neonatal period, with acute manifestations following milk intake, and is often fatal during infancy. Galactose restricted diet, the only currently available therapeutic strategy, can prevent or resolve the acute symptoms, but it is ineffective in preventing long-term complications, even in the cases with early identification and treatment. This pathology is frequently included in newborn screening (NBS) programs; nevertheless the risks and benefits of this screening are not sufficiently evaluated and its inclusion in NBS panels is not consensual. In Europe, it is only included in a minority of programs, while it is performed in all states of US. The Portuguese NBS program doesn’t include CG screening; however, several cases have been identified due to increased values of phenylalanine or, since the introduction of mass spectrometry analysis in 2004, due to the combination of increased values of phenylalanine and tyrosine or methionine in the metabolic screening. These three amino acids are markers of four different metabolic diseases, included in the Portuguese NBS panel, namely, phenylketonuria, tyrosinemia, classical homocystinuria and methionine adenosyltransferase I/III deficiency. Their combined increase is suggestive of galactosemia and, as differential diagnosis, in these cases total galactose is determined in the NBS sample. If an increased value of total galactose is found, these results are urgently reported to the metabolic center closer to the parents’ house. Since 2004, from the 1 016 168 newborns included in expanded NBS, eighteen positive cases for CG come to our knowledge, but only eight of this cases presented NBS results suggestive of CG. With the available data it wasn’t possible to establish any correlation between the NBS result and the sampling day or the specific mutations found in each case.
- Late‐onset Levodopa Responsive Parkinsonism Due to Polymerase γ 1 MutationsPublication . Calejo, Margarida; Vilarinho, Laura; Neiva, Raquel; Botelho, Luís; Ramalheira, João; Taipa, Ricardo; Melo‐Pires, Manuel; Lima, António Bastos; Damásio, JoanaIntroduction: Polymerase γI (POLG) gene mutations may induce mitochondrial DNA (mtDNA) instability leading to its depletion or multiple deletions1 and causing a wide spectrum of multisystemic disorders. Commonly described phenotypes include AlpersHuttenlocher syndrome, childhood myocerebrohepatopathy, myoclonic epilepsy myopathy and sensory ataxia, mitochondrial recessive ataxia syndrome, sensory ataxia neuropathy with dysarthria, and ophthalmoplegia and progressive external ophthalmoplegia (PEO).1 Levodopa-responsive parkinsonism has been described as a late feature in patients with PEO.
- Leber’s hereditary optic neuropathy – Molecular study of 540 Portuguese patientsPublication . Esteves, Sofia; Nogueira, Célia; Evangelista, Teresinha; Encarnação, Marisa; Teixeira, Marco; Neiva, Raquel; Pereira, Cristina; Vilarinho, LauraLeber's hereditary optic neuropathy (LHON) is a maternal hereditary disease that causes blindness due to optic atrophy, with typical onset during the second or third decade of life and affects predominantly males. The primary etiological factor relates to mutations in the mitochondrial genome. The purposes of this study were the screening of the most common mutations associated with LHON by PCR-RFLP (G11778A, G3460A, G15257A, and T14484A) in 540 Portuguese patients, the sequencing of MT-ND1 and MT-ND6 genes, considered as hot spot for LHON mutations by direct sequencing of PCR products and the establishment of genotypephenotype correlation in the characterized patients. Of the 540 patients studied, 30 harbor three of the most common mutations investigated and in other seven patients we found seven pathogenic mutations, two of them present in MTND1 gene (G3688C and A4123G) and not described in the literature. In the approach taken to patients studied with LHON phenotype it was possible to perform a genotype-phenotype correlation in 6.9% of cases and only 5.5% had the most common mutations, while 1.4% presented other mitochondrial DNA (mtDNA)mutations between which, two not yet described in the literature. In addition to the mutations found, were also identified several polymorphisms, which reflect the high variability of mtDNA. This study also underlines the importance of further clinical and biochemical data of the patients to better clarify the pathology and thus provide a more accurate and precise diagnosis in addition to a more targeted molecular study.