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- Vacinação antigripal da população portuguesa:18 anos de evolução da cobertura e os fatores associados a toma da vacinaPublication . Machado, Ausenda; Kislaya, Irina; Santos, Ana João; Nunes, BaltazarA vacinação continua ser a principal medida de prevenção da infeção pelo vírus da gripe e das complicações que lhe estão associadas. Neste contexto a monitorização da cobertura da vacina antigripal (VAG), principalmente nos grupos de risco, reveste-se da maior importância. Desde a época de 1998/1999, o Departamento de Epidemiologia do Instituto Nacional de Saúde Dr. Ricardo Jorge tem contribuído para a monitorização da cobertura da VAG através do projeto ECOS – Em Casa Observamos Saúde. O presente estudo tem como objetivos a avaliação a) da evolução e tendência da cobertura da vacina, no geral e por grupos etários específicos em 1998/1999 - 2015/2016; b) do impacto da introdução da gratuitidade na cobertura da vacina antigripal da população com 65 ou mais anos de idade; c) da evolução do momento e local de toma da vacina e de quem recomendou vacina e d) identificação de motivos subjacentes à toma da vacina antigripal, com recurso ao modelo de crenças em saúde.
- Molecular epidemiology and antibiotic resistance of Clostridium difficile: focus on toxin A-negative/toxin B-positive strains isolated in PortugalPublication . Menezes, Juliana; Oleastro, Mónica; Tenreiro, AnaClostridium difficile affects patients in hospitals and communities worldwide, is responsible for significant annual mortalities and represents a considerable economic burden on healthcare systems. This bacterium might also be carried asymptomatically in the gut, potentially leading to ‘silent’ onward transmission. Treatment has always been difficult, because the disease is both caused and resolved by antibiotic intake. The two main C. difficile virulence factors are toxins A and B, both of which are pro-inflammatory and enterotoxic in human intestine. Clinically relevant toxin A-negative/toxin B-positive strains that cause diarrhoea and colitis in humans have been isolated with increasing frequency worldwide, namely the multidrug resistant PCR-ribotype (RT) 017. Previous studies documented changes in C. difficile infection (CDI) epidemiology associated with the rapid emergence of antibiotic-resistant strains, highlighting the importance of antimicrobial susceptibility surveillance. The present work describes epidemiological and antimicrobial susceptibility data of C. difficile strains isolated in Portugal. A total of 378 C. difficile strains from 11 Portuguese hospital centres were characterized regarding toxin profile and RT, and part of these strains were also evaluated for its susceptibility to moxifloxacin, vancomycin, metronidazole, rifampicin and imipenem and determinants of antimicrobial resistance. Multilocus variable tandem repeat analysis (MLVA) and whole genome sequencing (WGS) analysis was also performed in a subgroup of epidemic, multidrug isolates. Most of the isolates were toxigenic (91.3%), of which 94.2% had both toxins A and B and 25.8% of them also had a binary toxin. Seventy-five different RTs were identified. RT027, RT014, RT106 and RT017 were the most frequently isolated. There was no evidence of resistance to vancomycin among the 183 tested strains, and reduced susceptibility to metronidazole was rare (2.2%). Resistance to moxifloxacin was evident in multiple RTs, and were mainly from RTs positive for the three toxins, RT027 (18/18), RT126 (8/9) and RT078 (6/12), except the RT017 (19/19), which is toxin A-negative/toxin B-positive. All moxifloxacin-resistant strains exhibited a known mutation in GyrA (Thr82Ile). Rifampicin resistance was found in 11.5% of the 183 strains tested, most from RT017 (19/19) but also in one strain from RT241 and other from RT043. Most rifampicin-resistant strains harbour the previously described mutations in RpoB (His502Asn and Arg505Lys), although one mutation, Ser507Leu, found alone in a resistant strain was not previously described. Of the 181 strains belonging to 57 RTs tested for imipenem susceptibility, only strains from RT017 showing high level of resistance to this antibiotic (MIC > 32 mg/L). The resistance determinants, ermB and tetM genes were present in 34 (10.1%) and in 63 (20.12%) strains, respectively, being that 22 (6.5%) contained both genes. Twenty strains were toxin A-negative/toxin B-positive, 19 of them belonging to the well-known emerging RT017, 11 from hospital A isolated in a short period of time suggesting that an outbreak have occurred, the remaining eight from hospital B, isolated between 2016 and 2017, where this RT seems to be endemic. Overall, these strains were multiresistant, presenting resistance to six of the 10 antibiotics tested: moxifloxacin, rifampicin, imipenem, tetracycline, clindamycin and erythromycin (these two belonging to the MLSB group), with high level of resistance. PCR screening of the resistance determinants showed that all strains harboured the tetM gene, but only the eight strains from hospital B were positive for ermB. Analysis by WGS revealed the presence of the ermG gene in the ermB-negative/MLSB-resistant strains. This gene was found to be in a putative mobile element of 63 kb exclusive of the hospital A clonal cluster. Transformation of a susceptible strain (C. difficile 630Δerm), with a plasmid containing the ermG gene, proved that the presence of this gene provides high resistance to clindamycin and erythromycin in C. difficile. Mutations in penicillin-binding proteins were also observed in all imipenem resistant strains. Phylogenetic analysis of single nucleotide polymorphisms (SNPs) of RT017 isolates collected from 2012 to 2017 revealed three clusters, each from a single hospital. Subtyping MLVA was also applied to detect the clonal spread of C. difficile belonging to toxin A-negative/toxin B-positive, and the results were overall similar with the WGS analysis. In addition, 74 SNPs variations were found among RT017 strains, namely in proteins involved in antimicrobial resistance and in hypothetical proteins. The current work gives a contribution to the knowledge of the molecular epidemiology and resistance patterns of C. difficile in Portugal. The results presented herein alert to the presence of multidrug resistant strains of RT017 in Portuguese hospitals in endemic and outbreak situations, and indicates the need for adequate use of antimicrobial agents, especially carbapenems, whose resistance was only observed among the strains of this emerging RTs. The lineage of strains from RT017 appears to be constantly evolving, acquiring new resistance determinants, which highlights the need for continued epidemiological and antimicrobial surveillance. The wide variety of RTs found suggests that there are other routes of transmission beyond nosocomial transmission, raising concern about the epidemiological change in this pathogen. As such, other potential sources, particularly in animals, which may also act as a reservoir for C. difficile and antimicrobial resistance determinants, should be investigated in the future. Finally, this study provides the basis for investigating important factors for the spread and persistence of toxin A-negative/toxin B-positive strains, such as studies on the importance of proteins that distinguish these strains, namely the hypothetical proteins.
- Application of an HPLC method for the quality control of vitamin C content in foods for infantsPublication . Silva, M.A.; Albuquerque, T.G.; Oliveira, M.B.P.P.; Costa, H.S.Vitamin C is an important water-soluble vitamin that humans are not able to synthesize, so it needs to be provided by the diet. Babies less than 1 year usually do not eat foods naturally rich in vitamin C, so the main sources are breast milk and/or infant formulas. Regulation (EU) No. 609/2013, Commission Delegated Regulation (EU) No. 2016/127 and Ministério da Agricultura, do Desenvolvimento Rural e das Pescas (2008) establishes compositional and information requirements for food intended for infants and young children [1-3]. Adequate intake of vitamin C is very important to assure children’s good health and development, so it is crucial to evaluate vitamin C content in this type of foods. The aim of this study was to validate a high-performance liquid chromatography (HPLC) method for the quality control of vitamin C content in infant foods (2 infant formulae (IF), 2 follow-on formulae (FF), 2 processed cereal-based foods (PCF) and 2 baby foods (BF)). In 2016, the infant foods were collected from major supermarket chains and parapharmacies in the region of Lisbon (Portugal). Two of the acquired samples were already ready-to-use, while the remaining samples were prepared according to manufacturer’s instructions. Separation and quantification of vitamin C was carried out on an Alliance 2695 HPLC system, with diode array detection (DAD), using a SynergiTM Hydro-RP analytical column (150 x 4.6 mm I.D., 4.0 μm particle size). Samples were monitored at 245 nm. The HPLC-DAD analytical method was validated for selectivity, linearity, LOD, LOQ, precision and accuracy, using an infant formula. Calibration curves were linear over the range 1-100 µg/mL. The achieved LOD and LOQ were 0.026 and 0.086 µg/mL, respectively. Vitamin C content in the analysed samples ranged from 1.5 ± 0.01 to 178 ± 1.01 mg/100 g for BF1 and PCF2, respectively. The developed method is rapid, specific, precise and accurate, for the quantification of vitamin C in different categories of foods for infants and young children, showing satisfactory data for all the tested parameters. Since this type of food products are very important for such young and vulnerable consumers, regulation and assurance of an adequate intake of essential nutrients, like vitamin C, is extremely important for a healthy development. References: [1] European Parliament/Council of the European Union. (2013). Regulation (EU) No 609/2013 of the European Parliament and of the Council of 12 June 2013 on food intended for infants and young children, food for special medical purposes, and total diet replacement for weight control. Official Journal of the European Union, L181, 35-56. [2] European Commission. (2016). Commission Delegated Regulation (EU) 2016/127 of 25 September 2015 supplementing Regulation (EU) No 609/2013 of the European Parliament and of the Council as regards the specific compositional and information requirements for infant formula and follow-on formula. Official Journal of the European Union, L25, 1-29. [3] Ministério da Agricultura, do Desenvolvimento Rural e das Pescas (2008). Decreto-Lei n.º 53/2008 de 25 de Março. Diário da República, 1ª série - Nº 59, 1667-1674.
- sdLDL como potencial biomarcador no diagnóstico e prevenção de doença cardiovascular em diabéticosPublication . Raimundo Centenico, AnaAs doenças cardiovasculares (DCV) são a principal causa de morbilidade e mortalidade a nível mundial. De entre os fatores de risco conhecidos para as DCV, destacam-se a dislipidemia, a hipertensão, a diabetes e o excesso de peso/obesidade. As lipoproteínas de baixa densidade (LDL) constituem um dos marcadores bioquímicos recomendados para diagnosticar as DCV. No entanto, as lipoproteínas mais pequenas e mais densas - small dense LDL (sdLDL) - parecem ter um efeito mais aterogénico, refletindo-se num risco acrescido de DCV. O doseamento de sdLDL tem demonstrado em diferentes estudos um aumento da sua concentração em indivíduos com Diabetes Mellitus do tipo 2. Este estudo pretende investigar esta associação na população portuguesa, tendo por base uma população do estudo e_COR. Os resultados deste estudo evidenciaram que os indivíduos diabéticos apresentam níveis de sdLDL superiores aos não diabéticos, registando-se uma forte associação entre o rácio sdLDL/LDL e a diabetes. A determinação deste rácio pode vir assim a ser considerado como um potencial biomarcador para diagnóstico de DCV em diabéticos, embora sejam necessários mais estudos epidemiológicos para uma conclusão mais definitiva.
- Avaliação da função tiroideia na população adulta portuguesaPublication . Ramos, Teresa; Mariano, Cibelle; Bourbon, MafaldaA Disfunção Tiroideia (DT) nas suas múltiplas formas patológicas, constitui um importante problema de saúde, geralmente subdiagnosticada, com uma prevalência estimada de 4-8%. A determinação da concentração de TSH em combinação com as frações FT4 e FT3 constitui o procedimento laboratorial principal para obter a informação precisa sobre a função tiroideia (FT). Neste trabalho, fez-se uma avaliação da FT na população portuguesa, baseada na amostragem do estudo e_COR, através do doseamento da TSH e da FT4 em 1673 indivíduos, distribuídos pelas 5 regiões de Portugal continental. A média destes dois parâmetros e a percentagem de indivíduos com TSH e FT4 com valores fora do intervalo de referência, foram avaliados de forma a obter uma estimativa da DT associada a critérios de hipo e hipertiroidismo. De acordo com estes critérios, obteve-se 7,77% de indivíduos com hipotiroidismo subclínico (4,00% mulheres e 3,77% homens) e 5,86% com FT4 diminuída (3,83% mulheres e 2,03% homens). Por outro lado, obteve-se 0,54% com hipertiroidismo subclínico e 1,44% com FT4 aumentada. Estas percentagens estão no geral em concordância com a literatura, e a elevada percentagem de hipotiroidismo subclínico mostra a importância da avaliação da FT na população pois constitui risco de desenvolvimento de hipotiroidismo clínico e suas consequências.
- Adaptação do ELEAT (Estudo Longitudinal de Exposição Ambiental a Toxinas) para Portugal: um estudo piloto para trabalhar a interação gene-ambiente na perturbação do espectro do autismoPublication . Rasga, CéliaEstudos recentes têm evidenciado que os factores genéticos representam cerca de 80% da etiologia da perturbação do espectro do autismo (PEA), sugerindo um papel importante de fatores não genéticos, entre os quais os fatores ambientais. A exposição pré, peri e pós-natal a uma variedade de fatores ambientais, incluindo bisfenol A, ftalatos, poluentes do ar e metais pesados, são exemplos destes factores. Assim, são necessárias ferramentas para avaliar a exposição ambiental na PEA. O Estudo Longitudinal de Exposição Ambiental a Toxinas (ELEAT), originalmente desenvolvida na Califórnia pela Universidade de Davis, é um questionário cujo objetivo é compreender o papel das exposições ambientais e sua influência no desenvolvimento de PEA. Esta ferramenta é dividida em 10 módulos: informações demográficas, condições maternas / Intervenções médicas, amamentação e dieta infantil, dieta materna, suplementos, estilo de vida, meio ambiente e ocupação e exposições e avaliação de instrumentos. As questões deste questionário avaliam três períodos críticos diferentes: 1) os 3 meses antes da concepção; 2) a gravidez e parto; 3) e o 1º ano de vida da criança, o que permite cobrir as principais fases do desenvolvimento neurológico precoce. Este questionário é preenchido pelas mães das crianças e pode ser administrado on-line ou em papel. Este estudo piloto ainda está na sua fase inicial, até ao momento foram recolhidas informações de dois grupos: o primeiro composto por mães de crianças em desenvolvimento típico e o segundo com mães de crianças com PEA, com o objetivo de obter feedback das mães sobre o questionário, como clareza, duração e relevância das questões. No geral, apesar das diferenças grupais, preocupações semelhantes foram relatadas. As principais conclusões positivas foram que as perguntas eram importantes, diretas e bem escritas, bem como a possibilidade de preenchê-lo on-line. As críticas negativas foram a amplitude e especificidade do questionário. A integração do feedback dos grupos permitiu-nos aprimorar o questionário e, consequentemente, melhorar a sua capacidade de reunir dados precisos para diversas populações. O ELEAT apresenta-se como uma ferramenta relevante. O instrumento, usando uma abordagem retrospectiva, aborda indiretamente a exposição a muitos tóxicos ambientais potencialmente relevantes para a perturbação. Consequentemente, quando combinado com dados genéticos e clínicos, pode permitir a detecção de casos específicos em que um indivíduo com uma determinada susceptibilidade genética pode estar em maior risco de desenvolver PEA somente quando exposto a um determinado tóxico.
- Efeito da sazonalidade no teor de carotenoides em frutos e produtos hortícolas consumidos em PortugalPublication . Almeida, Ana; Serra, Celeste; Dias, M. GraçaOs carotenoides são compostos presentes principalmente nos frutos e produtos hor tícolas e tendo em consideração o efeito benéfico para a saúde das dietas que os contêm, estudou-se a variação sazonal do alfa-caroteno, beta -caroteno, beta-criptoxantina, licopeno, luteína e zeaxantina em amostras de frutos e produtos hor tícolas recolhidas entre 2014 e 2015 na região de Lisboa, de acordo com a metodologia dos Estudos de Dieta Total. Esta metodologia foi harmonizada a nível europeu no âmbito do projeto TDSEXPOSURE (Total Diet Study Exposure – Estudo da dieta total para avaliação da exposição), financiado no âmbito do 7º Programa Quadro da União Europeia. A sazonalidade foi estudada na perspetiva da disponibilidade para o consumidor no mercado por tuguês nas quatro estações do ano. Em geral os teores totais de carotenoides nos produtos hor tícolas são superiores aos dos frutos, valores máximos de 22 mg/100 g para a cenoura (outono/inverno) e de 0,42 mg/100 g para a meloa (primavera), respetivamente. Para os produtos analisados, a variação do teor total de carotenoides entre o outono e o inverno foi significativa (p <0,05) apenas para a uva, maçã e salada de fruta. Para a batata, brócolos e pera o teor total de carotenoides não variou com a estação do ano (p >0,05). Em geral, observaram-se teores de carotenoides superiores na época de produção dos produtos em Portugal.
- Consumo de refrigerantes nas refeições principais em Portugal: dados do Inquérito Nacional de Saúde 2014Publication . Neto, Mariana; Kislaya, IrinaO excesso do consumo de açúcar simples está associado ao excesso de peso e obesidade, doenças crónicas e ocorrência de cáries dentárias. Uma par te significativa deste consumo é feita através de bebidas refrigerantes. Foi realizado um estudo com base nos dados do Inquérito Nacional de Saúde 2014 (INS 2014) com o objetivo de estimar a prevalência do consumo de refrigerantes e as suas características sociodemográficas na população por tuguesa, bem como a sua relação com a autoapreciação do estado de saúde, problema de saúde prolongado e limitação geral da atividade. Verificou-se que 31% da população afirmou ter consumido refrigerantes no dia anterior à entrevista do INS 2014, sendo mais frequente nos homens, em par ticipantes com idades jovens, nos solteiros, nas regiões autónomas, em pessoas com baixas habilitações literárias e nos escalões de rendimentos intermédios. Não se verificaram associações com as categorias do índice de massa corporal (IMC) nem com a autoapreciação do estado de saúde, problema de saúde prolongado e limitação geral da atividade.
- Folates in quinoa (Chenopodium quinoa), amaranth (Amaranthus sp.) and buckwheat (Fagopyrum esculentum): Influence of cooking and maltingPublication . Motta, Carla; Delgado, Inês; Matos, Ana Sofia; Gonzales, Gerard Bryan; Torres, Duarte; Santos, Mariana; Chandra-Hioe, Maria V.; Arcot, Jayashree; Castanheira, IsabelEffects of processing on the contents of five folate vitamers in quinoa, amaranth and buckwheat were analysed using a trienzymatic extraction method followed by LC–MS/MS. Total folate (TF) content, corresponding to the sum of folic acid (FA), 5-methyltetrahydrofolate (5-MTHF) and 10-formyltetrahydrofolate (10-CHOTHF) expressed as folic acid equivalent, in raw quinoa, amaranth and buckwheat were 309 ± 8.07, 228 ± 24.2 and 153 ± 12.4 μg/100 g dw, respectively, being dominantly 5-MTHF. Boiling and steaming reduced the TF in amaranth by 58% and 22%, respectively, whereas up to a 10–15% increase was observed in quinoa. Boiling and steaming did not significantly alter the TF content in buckwheat although significant changes were observed in some individual folate vitamers. Malting, on the other hand significantly increased TF content in amaranth by 21% (276 ± 14.2 μg/100 g dw) and buckwheat by 27% (193 ± 20.0 μg/100 g dw), whereas no significant change in quinoa was observed. Based on the EFSA recommendations, a portion of amaranth and quinoa (either boiled, steamed or malted) may contribute up to more than 25% of the dietary reference value for folates, whereas buckwheat may contribute only 14% when cooked and 19% when malted. Results demonstrate that quinoa, amaranth and buckwheat are good sources of folates, regardless of processing.
- Estudo da bioacessibilidade da patulina em sumos de fruta: o que acontece após a ingestão?Publication . Lopes, André; Martins, Carla; Assunção, Ricardo; Alvito, PaulaAs micotoxinas são contaminantes identificados com frequência em diversos géneros alimentícios incluindo fruta e produtos derivados. A exposição a estes metabolitos secundários produzidos por fungos pode provocar efeitos tóxicos para a saúde humana e animal. A patulina é uma micotoxina que ocorre sobretudo em maçãs e alimentos à base de maçã, incluindo os que são consumidos por crianças, tais como purés ou sumos de fruta. A ingestão de alimentos contaminados é considerada a principal via de exposição à patulina pelo que se considera relevante estudar a influência do processo digestivo na potencial toxicidade desta micotoxina. Para o efeito, neste estudo foram determinados os valores de bioacessibilidade da patulina nas fases oral (O), gástrica (G) e intestinal (I) quando presente em sumos de fruta à base de maçã, contaminados artificialmente, aplicando-se, pela primeira vez, o método harmonizado de digestão in vitro. Os valores de bioacessibilidade obtidos (O: 77,8%; G: 79,3%; I: 21,6%) sugerem uma redução dos teores de patulina que ocorre maioritariamente durante a fase intestinal, revelando também a existência de elevada bioacessibilidade nas fases oral e gástrica (superior a 75%). Os resultados indicam a necessidade de um estudo mais detalhado sobre os efeitos da patulina na fase gástrica atendendo ao potencial impacto na saúde humana, em especial em populações mais vulneráveis como as crianças.