DSA - Dissertações de mestrado
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- Comparative study of the cytotoxic effects of microcystin-LR in mammalian cell lines: Vero, HepG2, Caco2 and MDCKPublication . Menezes, Carina; Amorim, Ana; Alverca, ElsaMicrocystin-LR (MCLR) is a natural occurring freshwater cyanotoxin, recognized as one of the most toxic microcystin variants. It is thought to be responsible for cases of livestock and human intoxication due to consumption of toxic cyanobacteria-contaminated water. Although considered a hepatotoxin, MCLR also targets other organs such as the kidneys and intestines. In spite the cellular mechanisms associated with the toxicity of MCLR are still unclear, a previous work in a monkey kidney cell line suggested that the endoplasmic reticulum was an early target of MCLR toxicity and that autophagy was triggered as a cell defense mechanism at subcytotoxic concentrations of MCLR. In the present work, cytotoxic, morphological and ultrastructural effects of MCLR were compared in HepG2 (human liver), Vero (monkey kidney), MDCK (dog kidney) and Caco2 (human intestine) cell lines. MCLR induced a concentration-dependent decrease in cell viability by the NR assay in all cell lines, with HepG2 and Vero showing the lowest cytotoxic thresholds of 25 and 50 μM MCLR, respectively. In these cells, MCLR exposure induced lysosomal damages previously to mitochondrial disruption, reinforcing the role of lysosomes in MCLR-induced toxicity. Immunolabelling and ultrastructural visualization of autophagosomes, showed that autophagy was a response transversal to both cell lines, triggered at subcytotoxic MCLR concentrations, confirming its importance as a defense mechanism to early damages inflicted by the toxin. The analysis of GRP94, an ER stress protein, did not undoubtedly demonstrate that MCLR targets the ER. However, together with the ultrastructural data, suggested that in both HepG2 and Vero cells, the ER has a role in autophagy induction. Additionally, in HepG2 cells, GRP94 down-regulation with increasing MCLR concentrations supported the ER role in the triggering of apoptosis. At high toxin concentrations, ultrastructural alterations consistent with apoptosis were observed for all four cell lines, proving that this is a general MCLR-induced mechanism.
- Condições de Iluminação em Ambiente de Escritório: Influência no conforto visual [dissertações de mestrado]Publication . Pais, Aida Maria Garcia; Melo, Rui Miguel BettencourtCom o aumento da população laboral na actividade de escritório surge a necessidade de adequar estes espaços ao homem de forma a tornar o ambiente de trabalho motivante, e a melhorar o desempenho laboral. A adequada iluminação do posto de trabalho é um importante factor que contribui directamente para a segurança, saúde, bem-estar e conforto do trabalhador. As condições de iluminação condicionam a percepção do trabalhador face ao conforto visual, que se traduz em fadiga visual, stress e esforço físico. Este estudo pretendeu identificar condições anómalas e avaliar as condições de iluminação que influenciam o conforto visual dos trabalhadores em ambientes de escritório. A amostra do estudo é constituída por 143 indivíduos do sector administrativo, de 3 empresas. Os instrumentos usados para recolha de informação foram questionário, checklist, luxímetro e máquina fotográfica. Para tratar os dados foi usado o SPSS, versão 18. Efectuou-se análise descritiva, análise de inferência estatística sendo aplicados os testes de Kruskal-Wallis e de comparações múltiplas. Para a medição da iluminância e a uniformidade foram seguidas as normas europeias EN 12464 (2002), DIN 5035 (1990) e ISO 8995 (2002). Os resultados do estudo revelam desconforto visual (fadiga visual, irritabilidade ocular, dores de cabeça, dores musculares, dificuldade de concentração e de SVC) relacionado com o tempo de trabalho em computador sem pausas, com valores de iluminância inferiores aos valores recomendados e com a existência de brilhos e reflexos.
- Impact of microcystins on the growth and antioxidant system of aquatic bacteriaPublication . Miguéns, Diana; Valério, Elisabete; Reis, Ana[EN] Microcystins (MC) are the type of hepatotoxins more abundantly produced by cyanobacteria. Studies have shown that these toxins affect many multicellular organisms that inhabit aquatic ecosystems, however their impact on bacteria that cohabit with freshwater cyanobacteria is still unclear. In this work the impact of three variants of the MC (-LR,-RR,-YR) was evaluated on growth and antioxidant system of heterotrophic bacteria isolated from three Portuguese reservoirs where blooms of cyanobacteria are often observed, some having microcystin-producing strains, and also in bacteria isolated from a reservoir where these phenomena do not occur. To this end, morphological and molecular characterization of the bacterial isolates was proceeded and these bacteria were exposed to three different concentrations of each variant of the MC, and the effect on the bacterial growth curves was evaluated. The enzymatic activity of catalase (CAT) and SuperOxide Dismutase (SOD1 and SOD2) was determined spectrophotometrically at 240 nm and 550 nm, respectively, in cells exposed to the microcystin variants. It was found that MC can reduce the growth of most bacteria tested (62.5%), and some bacterial cultures grown with no effect (37.5%), while others reacted differently depending on the variant and concentration used on the same isolate. However, in two isolated bacteria a slight stimulation of growth was observed, although with no statistical significance. The results of the determination of CAT and SOD activities showed that the bacterial isolates were susceptible to 10 nM of each variant MC. In all strains tested there was an increase in CAT activity and, in relation to the SOD1 and SOD2 activities it was observed that, most bacteria had an increase of the each SOD activity when exposed to MC. However, not all isolates showed effects on SOD1 or SOD2 activities in the three variants of the MC used. This study showed that MCs can induce a reduction on the growth of most bacteria isolated from freshwater. In respect to the antioxidant system enzymes, all results point out that microcystins can induce oxidative stress in the bacteria tested and that CAT and SOD activities were activated as a defense mechanism to scavenge reactive oxygen species (ROS) increment.
- Avaliação da expressão de genes envolvidos na síntese de microcistinas em cianobactérias tóxicas sujeitas a diferentes intensidades de luzPublication . Salvador, Daniel; Valério, Elisabete; Dias, Deodália[PT] As cianobactérias são um grupo de microrganismos fitoplanctónicos, procariotas unicelulares, aeróbios e autotróficos. Encontram-se difundidos numa ampla variedade de habitats, ainda assim, são especialmente comuns em ambientes de água doce. A maioria das espécies existe normalmente em baixas concentrações no ambiente, no entanto, quando as condições ambientais são favoráveis, as células podem proliferar massivamente, levando à formação de florescências (blooms). Os blooms são um problema bastante actual e crescente em todo o mundo, dado que por vezes podem ser tóxicos e causar intoxicações e até a morte. A sua toxicidade resulta da capacidade que algumas espécies de cianobactérias produzirem toxinas. Dos vários grupos de cianotoxinas, as hepatotoxinas são umas das que mais frequentemente estão relacionadas com intoxicações. Deste grupo, as microcistinas são as mais comuns em corpos de água doce portugueses. A crescente consciencialização dos seus riscos tem resultado em vários estudos para compreender o seu mecanismo de síntese e os factores que podem regular/influenciar o mesmo. A síntese das microcistinas é não ribossomal, a partir de um mecanismo característico de tio-molde, e utilizando complexos multienzimáticos codificados pelos genes mcy. Relativamente aos factores regulatórios, diversos estudos têm vindo a demonstrar que os factores ambientais podem induzir alterações na concentração/produção de cianotoxinas, designadamente o pH, a concentração/proporção de nutrientes, a temperatura e a intensidade de luz. No entanto a informação existente não é consensual. Assim, este estudo tem como objectivo principal avaliar a influência da intensidade de luz na transcrição do gene mcyA e correspondente produção de microcistina em diferentes cianobactérias tóxicas. Simultaneamente pretendeu-se avaliar a influência das diferentes intensidades de luz na taxa de crescimento e ainda avaliar diferentes genes de referência para a normalização da expressão génica, obtida em RT-qPCR. Foram utilizados dois isolados produtores de microcistina - Microcystis aeruginosa (LMECYA 7) e Planktothrix agardhii (LMECYA 256). As culturas foram expostas durante 18 dias a três diferentes intensidades de luz (4, 20 e 30 μmol de fotões m-2 s-1) a uma temperatura de 20 ± 1ºC. Diariamente recolheram-se amostras para avaliar o crescimento das culturas, através da medição da densidade óptica. Em cada fase do crescimento colheram-se também amostras (três vezes) para efectuar a contagem celular, quantificação das microcistinas pela técnica de ELISA e extracção de RNA. Neste trabalho foi avaliada a expressão do gene mcyA pertencente ao cluster mcy, por RT-qPCR. Para além disso, foram ainda estudados genes de referência (rRNA 16S, gltA e rpoC1). Verificou-se uma correlação entre a taxa de crescimento e a intensidade de luz, quer em M. aeruginosa, quer em P. agardhii. As taxas de crescimento em ambas as espécies foram menores a 4 μmol de fotões m-2 s-1 e maiores a 30 μmol de fotões m-2 s-1. As diferenças foram mais acentuadas entre o crescimento na intensidade de 4 μmol de fotões m-2 s-1 e o crescimento nas intensidades de 20 e 30 μmol de fotões m-2 s-1. Já entre estas últimas duas intensidades a taxa foi bastante semelhante. O efeito das diferentes intensidades de luz foi mais acentuado em M. aeruginosa do que em P. agardhii. As concentrações de microcistina por célula em M. aeruginosa foram semelhantes entre intensidades de luz, sobretudo nas duas primeiras fases do crescimento. Apenas na fase estacionária as concentrações de toxina diferiram consideravelmente, tendo a maior produção ocorrido a 30 μmol de fotões m-2 s-1 e a menor a 4 μmol de fotões m-2 s-1. Em P. agardhii houve maiores diferenças na concentração de microcistina por célula entre intensidades de luz e fases do crescimento. A maior produção ocorreu a 4 μmol de fotões m-2 s-1 na fase estacionária e a menor a 20 μmol de fotões m-2 s-1 na fase exponencial de crescimento. Relativamente à estabilidade dos genes de referência, o gene rRNA 16S foi o menos estável em M. aeruginosa, mas o mais estável em P. agardhii, tendo em conta os algoritmos geNorm e NormFinder. O gene rpoC1 foi o mais estável em M. aeruginosa e o menos estável em P. agardhii, tendo em consideração os mesmos algoritmos. Usando o algoritmo BestKeeper, o gene gltA foi classificado como o mais estável em ambas as espécies. Utilizaram-se assim os genes rpoC1 e gltA em M. aeruginosa e os genes rRNA 16S e gltA em P. agardhii na normalização da expressão do gene mcyA. A expressão do gene mcyA nas três fases do crescimento em M. aeruginosa foi sempre significativamente diferente entre a intensidade 4 μmol de fotões m-2 s-1 e as intensidades de 20 e 30 μmol de fotões m-2 s-1, sendo que entre estas duas últimas a expressão foi semelhante. A maior expressão deu-se na intensidade de 4 μmol de fotões m-2 s-1. Em P. agardhii, apenas nas duas últimas fases do crescimento a expressão do mcyA foi significativamente diferente entre as várias intensidades luz. Nas duas últimas fases, os níveis de expressão de mcyA nas intensidades de 20 e 30 μmol de fotões m-2 s-1 foram inferiores ao nível de expressão a 4 μmol de fotões m-2 s-1. Já entre as duas intensidades de luz mais altas a expressão foi muito idêntica. A análise da evolução temporal da expressão do gene mcyA em cada intensidade de luz mostrou que em M. aeruginosa, de uma forma geral, a expressão variou sobretudo entre a fase de adaptação e a fase exponencial de crescimento. Os níveis de expressão foram máximos na fase de adaptação nas três intensidades de luz. Em P. agardhii, os níveis de expressão de mcyA ao longo do tempo não variaram igualmente nas três intensidades de luz. Ainda assim, a maior expressão observou-se na fase exponencial de crescimento. Não se verificou correspondência entre a expressão génica e a quantidade de microcistina efectivamente produzida por célula em nenhuma das espécies, pois as alterações verificadas na expressão de mcyA ao longo do tempo não foram acompanhadas por variações no mesmo sentido da quantidade de microcistina por célula. Conclui-se assim, que as intensidades de luz testadas influenciaram tanto o crescimento, como a produção de microcistina, como a expressão do gene mcyA, ainda que de forma diferente em M. aeruginosa e P. agardhii. Revelando que ainda há muitas questões em aberto que necessitam de ser esclarecidas em estudos futuros.
- Avaliação da resistência a antibióticos em estirpes de cianobactérias isoladas de ambientes hídricosPublication . Oliveira, Micaela; Dias, Elsa; Dias, Deodália[PT] Os ambientes hídricos constituem veículos para a emergência e disseminação da resistência a antibióticos. As cianobactérias encontram-se amplamente distribuidas nestes ambientes, estando frequentemente expostas a antibióticos, bactérias resistentes e genes de resistência. Contudo, o seu papel no resistoma hídrico nunca foi investigado. Este trabalho pretendeu avaliar a susceptibilidade de oito estirpes de Microcystis aeruginosa, oito estirpes de Planktothrix agardhii e oito estirpes de Planktothrix mougeotii a diferentes antibióticos (amoxicilina, ceftazidima, ceftriaxona, canamicina, gentamicina, tetraciclina, ácido nalidíxico, norfloxacina e trimetoprim). Para tal, foi utilizado um procedimento baseado no método standard Broth Microdilution para bactérias, no qual as cianobactérias foram expostas a diluições sucessivas de cada antibiótico em meio Z8 (0,0015 mg/L – 1,6 mg/L) e mantidas numa câmara de culturas sob ciclos de 14 horas de luz – com uma intensidade de 16 ± 4 μEm-2 s-1 – e 10 horas de escuro, a uma temperatura de 20 ± 1ºC. O crescimento celular foi seguido durante 14 dias (observação macroscópica, microscópica e leitura da DO450nm) e as concentrações inibitórias mínimas de cada antibiótico (CIMs) foram calculadas para cada estirpe. Nenhuma das estirpes foi susceptível a qualquer das concentrações de ácido nalidíxico e de trimetoprim testadas. Adicionalmente, as estirpes de M. aeruginosa apresentaram uma susceptibilidade reduzida à tetraciclina, as estirpes de P. agardhii apresentaram uma susceptibilidade reduzida à norfloxacina e as estirpes de P. mougeotii não foram susceptíveis à amoxicilina nem à norfloxacina e apresentaram uma susceptibilidade reduzida à tetraciclina. Foi também pesquisada a presença de genes e de integrões associados à resistência a antibióticos nas cianobactérias em estudo por PCR e posterior sequenciação dos produtos obtidos. Foram encontrados genes de resistência à estreptomicina numa estirpe de M. aeruginosa, em três estirpes de P. agardhii e em quatro estirpes de P. mougeotii; genes de resistência às sulfonamidas em quatro estirpes de M. aeruginosa, em três estirpes de P. agardhii e em cinco estirpes de P. mougeotii; integrões de classe 1 em duas estirpes de M. aeruginosa, em três estirpes de P. agardhii e em três estirpes de P. mougeotii. Adicionalmente, o gene qacE foi encontrado numa estirpe de M. aeruginosa e numa estirpe de P. agardhii. Os resultados obtidos sugerem que as cianobactérias apresentam resistência intrínseca a alguns antibióticos e que, de acordo com o seu local de origem, podem apresentar resistência adquirida a outros. Assim, tudo indica que, de facto, as cianobactérias desempenham um papel importante no resistoma hídrico.
- Explorando a razão de bactérias do meio aquático não serem afetadas por microcistinas: sistema antioxidante vs. degradaçãoPublication . Pinto, André; Valério, Elisabete; Rebelo, Maria TeresaAs microcistinas são a classe de hepatotoxinas mais vulgarmente produzidas por cianobactérias. Estas são encontradas em ecossistemas aquáticos onde convivem com outros microorganismos, tais como Aeromonashydrophila e Flavobacteriumsp. Já existe uma quantidade razoável de estudos sobre o efeito de microcistinas em organismos eucarióticos, mas existem poucos estudos sobre os efeitos destas toxinas em microorganismos. Os escassos estudos existentes mostram que as microcistinas podem causar uma diminuição do crescimento microbiano, nâo o inibindo completamente. Neste estudo, o objectivo é determinar a razão pela qual bactérias heterotróficas aquáticas não são muito afectadas pela presença de microcistinas no seu meio de crescimento. Para tal, a actividade de algumas enzimas do sistema antioxidante foram avaliadas e a presença de genes responsáveis pela degradação das microcistinas (mlrA-D) foi avaliada em isolados recuperados a partir de água doce onde as microcistinas são comumente encontradas. Estes resultados foram comparados com as bases pré-existentes na literatura para avaliar a importância da presença ou ausência dos genes responsáveis pela degradação microcistinas com a resistência natural encontradas nas bactérias heterotróficas aquáticas. Além disso, a actividade das enzimas do sistema antioxidante também foi contabilizada para explicar este comportamento.Os comportamentos observados parecem indicar que estão mais relacionados com especificidades da estirpe, não havendo um comportamento similar entre os isolados da mesma espécie. Devido ao facto deste tema de trabalho se inserir numa área ainda pouco explorada, existem atualmentemais questões do que respostas. Contudo, não se pode deixar de destacar a relevância do tema, devido à necessidade de perceber o impacto da presença das cianotoxinas nos ecossistemas do meio aquático.
- Characterization of fungal community associated with house dustPublication . Amaro, Raquel; Sousa, Ana Catarina Almeida; Barroso, Carlos Miguel MiguezWith the increasing urbanization, the world population spends more and more time indoors, where exposure to contaminants inside buildings can be high. This scenario leads to a degradation of Indoor Air Quality (IAQ), which, in extreme cases, can lead to Sick Building Syndrome (SBS). Fungi can be found in all types of environments and the fungal community found inside buildings plays an essential role in the health of individuals that use these locations. Dust in particular, acts as a reservoir of all contaminants inside buildings, including fungi and can be used to characterize the indoor environment. The coexistence of individuals with the fungi in the interior of a building is not always beneficial to health. There are strong associations between the patients with respiratory allergies and sensitization to molds where the latter play an important role in the development, persistence and severity of the former. For this type of immunologically susceptible individuals, exposure to fungal contamination can trigger respiratory symptoms such as asthma. Thus, this work aims in a first stage to characterize the fungal community in house dust samples from houses built along different decades using different dust sampling procedures and in a second stage to characterize the fungal community in dust from the houses of asthmatic patients and respective controls in order to unravel possible associations. This work was divided into two key points: i) to identify the fungal community in house dust and its abundance ii) to associate the fungal genera found with the severity of asthma. The most abundant fungal genera found were Aspergillus, Penicillium, Cladosporium, Alternaria and yeast. As for the association to asthma exacerbations, no association was found. However, given the preliminary nature of point ii), a larger number of samples will be necessary in order to draw any robust conclusions.
- Antimicrobial effect of polymeric biomaterials for bone infection treatmentPublication . Ferreira, Magda; Bettencourt, Ana; Jordão, LuísaBone infection, mainly caused by Staphylococcus aureus, is a public health concern. Treatment is challenging due to multi-resistant strains, and S. aureus ability to adhere and form biofilm on bone and implant surfaces, as well as to invade and persist in osteoblast cells. The present work consisted in the preparation and evaluation of novel acrylic polymeric systems that provide local and controlled antibiotic delivery for the treatment of bone infection, namely levofloxacin-loaded acrylic bone cement (BC), and vancomycin or daptomycin-loaded acrylic microparticles (MP). Properties of both delivery systems with high impact on clinical performance were tested. Namely, contact angle and surface energy were determined in BC matrices and encapsulation efficiency in MP formulations. Release studies of levofloxacin-loaded BC matrices were also conducted. Also, the anti-biofilm activity of these systems was evaluated against S. aureus strains. Furthermore, BC and MP formulations were tested concerning the antibacterial intracellular activity using a human osteoblast infection model. Overall, both BC formulations’ surface characteristics and MP encapsulation efficiency were in agreement with previously published data. The release studies of levofloxacin from BC matrices showed that the drug release is size- and incubation medium-dependent. All BC matrices loaded with levofloxacin concentrations of 1.5 % or higher exhibited anti-biofilm activity against all S. aureus tested strains. For BC matrices and Vancomycin-loaded MP, a decrease of viable intracellular bacteria was observed. For Daptomycin-loaded MP, no viable intracellular bacteria were detected. In conclusion, this work has shown that the BC formulations with drug concentration of 1.5 % or 2.5 % and daptomycin-loaded MP show potential to be used in the context of bone infection treatment.
- Evaluation of cytotoxic and genotoxic effects of Microcystin-LR in Saccharomyces cerevisiaePublication . Barreiros, Sara; Valério, Elisabete; Dias, DeodáliaMicrocystins (MC) are hepatotoxins produced by cyanobacteria. Among the MCs, the microcystin-LR (MC-LR), produced by several cyanobacterial species, especially by the species Microcystis aeruginosa, is the most abundant and also the most well studied cyanotoxin. MCs are cyclic peptides which have high affinity for protein phosphatases Serine/Threonine (PPs), namely PP1 and PP2A, thus acting as their inhibitors, especially of the last one. It is from these interactions that a series of events occur which are responsible for the MCs cytotoxic and genotoxic effects on animal cells. It is also known that MCs induce oxidative stress in cells due to the production of reactive oxygen species (ROS), however a complete characterization of the effects of these toxins has not yet been obtained. This project intends to clarify some of the molecular mechanisms of MC-LR toxicity in animal cells using Saccharomyces cerevisiae as an eukaryotic organism model. To evaluate the cytotoxic effects of MC-LR, a cell viability assay was used to determine the functional capacity of the mitochondria, the MTT assay, after exposing the yeasts to different concentrations of MC-LR for 4 hours. Genotoxic effects were evaluated by gene expression studies for genes Rad27, Apn1, Apn2, Ntg1 and Ntg2 (from the BER DNA repair system) and Cdc55 gene which encodes the PP2A phosphatase protein, using the Real-Time qPCR technique. The reference genes used for expression normalization were Alg9 and Taf10. Furthermore, it was attempted to adapt the single cell gel electrophoresis assay (comet assay), conventionally performed on mammalian cells, to Saccharomyces cerevisiae cells, in order to quantify induced DNA breaks. MTT was optimized and successfully used in S. cerevisiae. Apparently, MC-LR is not cytotoxic for Saccharomyces cerevisiae, although these results should be confirmed with other methods that accessed cell viability. Regarding the Comet assay, the results were not conclusive, possibly due to the difficulty in optimizing the method when applied to yeast cells, particularly in the DNA migration on the electric field. However, the first two steps of the YCA protocol were optimized. Concerning the RTqPCR method it was possible to obtain tendencies in the gene expression levels, when compared with the control situation, thus revealing that MC-LR affects differently both BER pathways. Despite the difficulty of reproducing some methods in yeast cells, it appears that microcystin- LR plays a critical role in the toxicity of eukaryotic cells. This work allowed us to contribute with a little more information to a still relative unknown study field.
- Life-course exposure and its influence on frailty syndromePublication . Lage, Bruna; Costa, Solange; Teixeira, João PauloOne area of health concern is reducing the burden of environmentally induced disease in populations that may be more susceptible to the effects of exposures to contaminants. The potential to reduce the prevalence of some major diseases is driving research to understand the totality of exposures over the course of our lifetimes. Older adults are well-recognized susceptible subpopulation. Health status in older adults is complex and multidimensional. One metric is frailty, a state of increased vulnerability to stressors, characterized by decreased physical and mental functioning and an increased risk for poor health outcomes. The European Commission has appointed Ageing one of the main priorities in the next Horizon 2020 Framework Program, the prevention of frailty in old age is one of the key actions identified. The aim of the present study is to build and apply a life-course exposure questionnaire and study the association with DNA basal damage and oxidative damage endpoints with frailty syndrome, contributing to the knowledge of the mechanistic pathways and syndrome aetiology. A total of 61 voluntary individuals aged 65 and over were involved in the study from senior recreational community associations and day care centres, located in metropolitan region of Oporto. Frailty assessment was performed using Fried’s frailty model and the individuals were classified as robust, pre-frail or frail. Life-time exposure was evaluated by a selfreported life-course exposure questionnaire and a job exposure matrix application. DNA basal damage and DNA oxidative damage endpoints were measured through comet assay in whole blood. Study population was classified as 47.5% robust, 49.2% pre-frail and 3.3% frail. A relation between the prevalence frailty with age and with gender was observed, with women and older elderly displaying higher rates of frailty. A relation between frailty status and secondhand smokers was found, since higher prevalence of exposure to tobacco smoke was found in pre-frail group (23.3%) when compared with the robust individuals (10.4%). Associations between frailty status and consumption of home-produced vegetables were found, with robust individuals consuming more home-produced vegetables (71.4%) from this source compared to pre-frail individuals (28.6%) that eat those aliments. Furthermore, associations between the consume of these vegetables and DNA damage in robust groups were found, since the robust individuals that include these aliments in their diet showing lower DNA damage than robust individuals that not consumption those aliments from particular produced sources. Regarding the effects of the variables studied, a significant influence was found on the genotoxic endpoints for gender and age within the robust group (p<0.05). Thus, significant differences were observed between the basal damage between robust females and males and between the oxidative damage between earlier age group and 75- 84 age group. Lastly, also a relation was verified between the role of current exposures and the DNA damage, regarding household-proximity to farming operation within the robust group. Thus, robust individuals that reported to live near of this activity have higher basal and oxidative damage than those robust individuals that do not live near farming operations (p<0.05). Data obtained provides preliminary information on relations between exposure, frailty syndrome and DNA damage. Further studies need to be performed in order to deepen the knowledge about frailty aetiology and the possible role of life-course exposures, helping to understand how the past may affect the future.