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- Acquired Vitamin B12 Deficiency in Newborns: Positive Impact on Newborn Health through Early DetectionPublication . Lipari Pinto, Patrícia; Florindo, Cristina; Janeiro, Patrícia; Santos, Rita Loureiro; Mexia, Sandra; Rocha, Hugo; Tavares de Almeida, Isabel; Vilarinho, Laura; Gaspar, AnaThe early diagnosis of and intervention in vitamin B12 deficiency in exclusively breastfed infants by mothers with low vitamin B12 is crucial in preventing possible irreversible neurologic damage, megaloblastic anemia, and failure to thrive. We assess the usefulness of the early detection of asymptomatic B12 deficiency related to acquired conditions and highlight the importance of monitoring serum vitamin B12 levels during pregnancy. We describe demographic, clinical, dietary, and biochemical data, including the evolution of a vitamin B12 deficiency's functional biomarkers. We enrolled 12 newborns (5 males) with an age range of 1-2 months old that were exclusively breastfed and asymptomatic. These cases were referred to our metabolic unit due to alterations in expanded newborn screening: high levels of methylmalonic acid and/or total homocysteine (tHcy). All mothers were under a vegetarian diet except three who had abnormal B12 absorption, and all presented low or borderline serum B12 level and high plasma levels of tHcy. Supplementation with oral vitB12 re-established the metabolic homeostasis of the mothers. In infants, therapy with an intramuscular injection of 1.0 mg hydroxocobalamin led to the rapid normalization of the metabolic pattern, and a healthy outcome was observed. Acquired B12 deficiency should be ruled out before proceeding in a differential diagnosis of cobalamin metabolism deficits, methylmalonic acidemia, and homocystinuria.
- Aplicação do seis sigma na avaliação da inexatidão (bias) dos resultados laboratoriais do cortisol sérico (2012-2014)Publication . Gaspar, Ana; Faria, Ana Paula; Requeijo, José; Correia, Helena; Cardoso, Ana; Brito, Cristina; Madureira, DeolindaIntrodução: Na prática laboratorial, é crescente a preocupação com a obtenção de resultados fidedignos, que apoiem corretamente os profissionais de saúde no diagnóstico, tratamento e controlo de patologias nos utentes. Requer especial atenção, a variabilidade dos resultados analíticos entre diferentes laboratórios, para um determinado parâmetro de medição. A trabalhar neste sentido, o Programa Nacional de Avaliação Externa da Qualidade (PNAEQ), tem como missão a promoção, organização e coordenação de programas de Avaliação Externa da Qualidade (AEQ), e o objetivo de avaliar o desempenho interlaboratorial dos laboratórios participantes.
- Aplicação do Seis Sigma na avaliação da inexatidão (Bias) dos resultados laboratoriais do parâmetro cortisol sérico, 2012-2014Publication . Gaspar, Ana; Faria, Ana; Requeijo, José; Correia, Helena; Cardoso, Ana; Brito, Cristina; Madureira, DeolindaÉ objeto de estudo, os resultados dos laboratórios participantes obtidos pelo PNAEQ, no programa de Endocrinologia, para o parâmetro Cortisol Sérico, entre os anos de 2012 e 2014, de forma a detetar problemas e causas para a variabilidade entre laboratórios na medição do mesmo lote de amostra.
- Aplicação do seis sigma na avaliação da inexatidão (bias) dos resultados laboratoriais do parâmetro cortisol sérico: 2012-2014Publication . Gaspar, Ana; Faria, Ana Paula; Requeijo, José; Correia, Helena; Cardoso, Ana; Brito, Cristina; Madureira, DeolindaIntrodução: Na prática laboratorial, é crescente a preocupação com a obtenção de resultados fidedignos, que apoiem corretamente os profissionais de saúde no diagnóstico, tratamento e controlo de patologias nos utentes. Requer especial atenção, a variabilidade dos resultados analíticos entre diferentes laboratórios, para um determinado parâmetro de medição. A trabalhar neste sentido, o Programa Nacional de Avaliação Externa da Qualidade (PNAEQ), tem como missão a promoção, organização e coordenação de programas de Avaliação Externa da Qualidade (AEQ), e o objetivo de avaliar o desempenho interlaboratorial dos laboratórios participantes.
- Aplicação do Seis Sigma na Avaliação da Inexatidão dos Resultados Laboratoriais do Parâmetro Cortisol SéricoPublication . Gaspar, Ana; Requeijo, José; Faria, Ana Paula[PT] No desenvolvimento deste caso de estudo, dentro do Programa Nacional de Avaliação Externa da Qualidade do Instituto Nacional de Saúde Doutor Ricardo Jorge utilizou-se o Seis Sigma como metodologia e como métrica, de maneira a estruturar de forma intuitiva a sua aplicação na resolução de problemas e definir o principal objetivo. Como metodologia, o Seis Sigma recorre a diversas técnicas e ferramentas da qualidade, que visam a melhoria contínua de procedimentos. Enquanto métrica, o Seis Sigma apresenta uma meta a atingir para a qualidade. O ideal seria atingir-se a meta dos Seis Sigma, que significa 3,4 defeitos por milhão de oportunidades (taxa de defeitos de um determinado procedimento). Para reduzir a variabilidade de resultados entre laboratórios, referentes ao parâmetro Cortisol Sérico, aplicou-se o ciclo DMAIC (Define – Measure – Analyze – Improve – Control), a que correspondem cinco etapas diferentes. Em cada uma destas etapas utilizam-se as técnicas e ferramentas da qualidade, como referido anteriormente acerca do Seis Sigma enquanto metodologia, com o objetivo de melhorar processos. Inicia-se a primeira etapa com a identificação do problema e finaliza-se a última com o controlo e monitorização dos efeitos provocados pelas ações de melhoria implementadas. O objetivo dos programas de Avaliação Externa da Qualidade do Programa Nacional de Avaliação Externa da Qualidade é avaliar a performance quanto à variabilidade/uniformidade de resultados entre os laboratórios participantes. É de extrema importância a harmonização de resultados clínicos entre laboratórios, pois são estes resultados que fornecem informações ao profissional de saúde, sobre o estado de saúde do paciente, auxiliando no diagnóstico, tratamento e controlo de doenças. Caso isto não aconteça, será um fator crítico que pode fazer a diferença na saúde pública. Foram identificadas as causas de erros sistemáticos, causas de inexatidão laboratorial, a nível de métodos, equipamentos, reagentes e calibradores utilizados em laboratório e implementadas ações de melhoria mais relevantes. No final obteve-se um nível de qualidade sigma superior ao inicial, tal como tinha sido previsto nos objetivos. O nível da qualidade deve ser controlado ao longo do tempo, com o objetivo de identificar novas anomalias e melhorar continuamente.
- Aplicação do Seis Sigma na Avaliação da Inexatidão dos Resultados Laboratoriais do Pârametro Cortisol SéricoPublication . Gaspar, Ana; Requeijo, José; Navas, Helena; Faria, Ana PaulaEm laboratório é crescente a preocupação com a obtenção de resultados fidedignos, que apoiem corretamente os profissionais de saúde no diagnóstico, tratamento e controlo de patologias. Com o objetivo de harmonizar resultados, analisaram-se os dados de Avaliação Externa da Qualidade do Cortisol, para detetar problemas e causas de variabilidade interlaboratorial (inexatidão), na medição do mesmo lote de amostra. Utilizou-se o Seis Sigma enquanto metodologia e métrica. Enquanto metodologia, recorreu-se à aplicação do ciclo DMAIC, suportado por técnicas e ferramentas da qualidade. O nível de desempenho laboratorial calculado na fase Measure foi de 2,82 Sigma. O nível sigma ideal seria de 6, correspondendo a 3,4 resultados fora da especificação da qualidade definida, num milhão de resultados. Analisando as causas mais prováveis para o problema, na fase Analyze, e selecionando e implementando as ações de melhoria (relacionadas com o manuseamento da amostra de controlo), na fase Improve, constatou-se que estas foram adequadas, pois atingem o foco do problema, aumentando o nível sigma (para 3,6). Alcançou-se a meta determinada na fase Define (3,5 Sigma), no entanto, será necessário garantir que as melhorias continuam a fazer-se sentir (Fase Control). Os principais beneficiados são os utentes, pois aumentarão a confiança nos resultados, independentemente do laboratório.
- Avanços no diagnóstico das doenças mitocondriais através da sequenciação de nova geraçãoPublication . Célia, Nogueira; Pereira, Cristina; Silva, Lisbeth; Encarnação, Marisa; Teles, Elisa Leão; Rodrigues, Esmeralda; Campos, Teresa; Janeiro, Patrícia; Gaspar, Ana; Soares, Gabriela; Bandeira, Anabela; Martins, Esmeralda; Magalhães, Marina; Santos, Helena; Vieira, Luís; Vilarinho, LauraO recente desenvolvimento da tecnologia de sequenciação de nova geração (NGS) revolucionou o diagnóstico molecular das doenças genéticas raras, de difícil diagnóstico, tais como as doenças mitocondriais. O estudo destas patologias foi implementado em 1993 pelo nosso grupo e até à data foram investigados mais de 2500 doentes portugueses. Muitos destes doentes ainda não dispõem de diagnóstico molecular, pelo que foi desenvolvida uma estratégia de NGS para a identificação da mutação causal. A sequenciação de um painel de 209 genes nucleares associados a doenças mitocondriais e do DNA mitocondrial completo por NGS, foi realizada num sequenciador MiSeq (Illumina). O estudo de 145 doentes permitiu identificar 41 mutações causais e caraterizar 35 doentes. Esta investigação contribuiu para esclarecer a etiologia molecular destes doentes (35/145; 24%), ii) alargar o espetro mutacional destas patologias e, iii) oferecer um aconselhamento genético e um eventual diagnóstico pré-natal aos casais em risco. O desenvolvimento de um painel, específico para estas patologias, tem um caráter inovador e reforça o nosso Centro como laboratório nacional para o estudo e investigação de doenças mitocondriais.
- Bases moleculares de los defectos en el complejo mitocondrial ETF/ETF-QOPublication . Rocha, Hugo; Nogueira, Célia; Martins, Esmeralda; Rodrigues, Esmeralda; Leão, Miguel; Sousa, Carmen; Fonseca, Helena; Marcão, Ana; Gaspar, Ana; Brandão, Otilia; Santos, Helena; Coelho, Teresa; Ribeiro, J. Miguel; Vilarinho, LauraDefectos en el complejo mitocondrial ETF/ETF-QO (ETF - flavoproteína transferidora de electrones; ETFQO - flavoproteína transferidora de electrones ubiquinona oxidorreductasa), resultan en la disfunción secundaria de 11 deshidrogenasas que utilizan este complejo para transferir los electrones a la cadena de transporte electrónico, bloqueando la β-oxidación de los ácidos grasos, de aminoácidos y de la colina. Defectos en el funcionamiento del complejo resultan en una deficiencia multiple de acil-CoA deshidrogenasas (MADD; aciduria glutárica tipo II; OMIM 231680) que representa un grupo muy heterogéneo de enfermedades metabólicas tanto desde el punto de vista clínico como molecular. Pueden tener como causa mutaciones en los genes que codifican para las subunidades del complejo (ETFA, ETFB y ETFDH), genes que codifican los transportadores de riboflavina, del transporte ó de la síntesis del FAD. Bioquímicamente, las MADD se caracterizan por la acumulación de acilcarnitinas de cadena corta, media y larga, siendo su detección la abordaje primaria al diagnóstico, incluso en cribado neonatal. La multiplicidad de defectos genéticos que pueden cursar por una disfunción del complejo ETF/ETF-QO (creyéndose que siguen sin estar identificados todos), el hecho de que no siempre están presentes los marcadores bioquímicos evidentes (acumulación de las acilcarnitinas características) y la grande variabilidad clínica son factores que conducen a una dificultad aumentada en de diagnóstico de este grupo de errores congénitos del metabolismo. En este panorama el conocimiento de la epidemiologia molecular es fundamental. Los autores presentaran las bases moleculares de los trastornos en el funcionamiento del complejo ETF/ETF-QO en Portugal.
- Biochemical and molecular heterogeneity in carnitine palmitoyltransferase ii deficiencyPublication . Sousa, Carmen; Fonseca, Helena; Rocha, Hugo; Marcão, Ana; Vilarinho, Laura; Diogo, Luísa; Sequeira, Sílvia; Costa, Cristina; Leão, Elisa; Conceição, Isabel; Gaspar, AnaIntroduction: Carnitine palmitoytransferase II (CPTII) deficiency is a recessively inherited disorder of lipid metabolism. CPT II deficiency has several clinical presentations: the adult form is characterized by episodes of rhabdomyolysis, usually triggered by extensive exercice, cold, fever or prolonged fasting and the infantile-type CPT II hepatocardiomuscular form presents as severe attacks of hypoketotic, hypoglycemia, occasionally associated with cardiac damage. Molecular analysis of CPT II gene allows not only confirmation of classical forms, with typical biochemical abnormalities, but is also key for the diagnosis of less severe forms.The authors will present biochemical and molecular findings of eight CPT II, patients. Material and methods: Acylcarnitine profiles, on dried blood spots, were done as previously reported (Vilarinho et al) Molecular analysis of CPT II gene was done by direct sequencing as reported elsewhere (Finocchiaro et al.). From the eight patients, three were detected through newborn screening and five with clinical symptoms. Results: More pronounced abnormalities in the acylcarnitine profiles are associated with neonatal forms of the disease, while the patients with late onset forms present smother alterations or completely normal profiles. This biochemical heterogeneity correlates well with genetics data. The molecular analysis revealed the presence of ten different mutations, which seven were never reported. Discussion: Our results support that newborn screening can efficiently detect infantile CPT II deficiency but is less effective in detecting adult forms, were biochemical abnormalities may only be present during acute episodes. In these cases accurate clinical characterization alongside with molecular analysis are the key for diagnosis. Bibliography: J.P. Bonnefont, F. et al (2004) Mol. Aspects Med. 25 495–520. Rashed MS, et al.(1995) Diagnosis of inborn errors of metabolism from blood spots by acylcarnitines and amino acids profiling using automated electrospray tandem mass spectrometry. Pediatr Res.38:324–331 Finocchiaro, G. et al (1991). cDNA cloning, sequence analysis, and chomosomal localization of the gene for human carnitinepalmitoyltransferase. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 88, 661–665. K. Gempel1 et al. (2002).Screening for Carnitine Palmitoyltransferase II Deficiency by Tandem Mass Spectrometry Anichini A.et al(2011) Genotype-phenotype correlations in a large series of patients with muscle type CPT II deficiency Vilarinho et al. (2009) Four Years of Expanded Newborn Screening in Portugal with MS/MS
- Complex genetic findings in a female patient with pyruvate dehydrogenase complex deficiency: Null mutations in the PDHX gene associated with unusual expression of the testis-specific PDHA2 gene in her somatic cellsPublication . Pinheiro, Ana; Silva, Maria João; Pavlu-Pereira, Hana; Florindo, Cristina; Barroso, Madalena; Marques, Bárbara; Correia, Hildeberto; Oliveira, Anabela; Gaspar, Ana; Tavares de Almeida, Isabel; Rivera, IsabelHuman pyruvate dehydrogenase complex (PDC) catalyzes a key step in the generation of cellular energy and is composed by three catalytic elements (E1, E2, E3), one structural subunit (E3-binding protein), and specific regulatory elements, phosphatases and kinases (PDKs, PDPs). The E1α subunit exists as two isoforms encoded by different genes: PDHA1 located on Xp22.1 and expressed in somatic tissues, and the intronless PDHA2 located on chromosome 4 and only detected in human spermatocytes and spermatids. We report on a young adult female patient who has PDC deficiency associated with a compound heterozygosity in PDHX encoding the E3-binding protein. Additionally, in the patient and in all members of her immediate family, a full-length testis-specific PDHA2 mRNA and a 5′UTR-truncated PDHA1 mRNA were detected in circulating lymphocytes and cultured fibroblasts, being bothmRNAs translated into full-length PDHA2 and PDHA1 proteins, resulting in the co-existence of both PDHA isoforms in somatic cells.Moreover, we observed that DNA hypomethylation of a CpG island in the coding region of PDHA2 gene is associatedwith the somatic activation of this gene transcription in these individuals. This study represents the first natural model of the de-repression of the testis-specific PDHA2 gene in human somatic cells, and raises some questions related to the somatic activation of this gene as a potential therapeutic approach for most forms of PDC deficiency.