DPSPDNT - Apresentações orais em reuniões nacionais
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- Genetics of familiar hypercholesterolemia and hypertriglyceridemiaPublication . Bourbon, Mafalda
- Caracterização bioquímica e molecular de doentes com diagnóstico clínico de Dislipidemia Familiar CombinadaPublication . Santos, T.; Rato, Q.; Gaspar, I.M.; Guerra, A.; Rico, M.T.; Sequeira, S.; Silva, J.M.; Bourbon, M.A Dislipidemia Familiar Combinada (FCHL) é uma doença poligénica caracterizada por hiperlipidemia simples ou combinada, variabilidade intra-individual e intra-familiar do perfil lipídico, ApoB elevada (> 120 mg/dL) e risco elevado de doença cardiovascular (DCV). A sua causa é desconhecida mas alterações nos genes LPL, APOAIV, APOAV, APOCIII e USF1 parecem contribuir para o seu fenótipo. O objectivo deste estudo é caracterizar bioquímica e molecularmente doentes com diagnóstico clínico de FCHL. Todos os exões e promotor dos genes LPL, APOAIV, APOAV, APOCIII e regiões do gene USF1 (s1,s2) de 41 doentes foram amplificados por PCR e sequenciados. O colesterol total (CT), c-LDL, c-HDL, sdLDL, trigliceridos (TG), apoB e apoCIII foram determinados num aparelho automatizado. Em alguns doentes as sdLDL foram também analisadas por electroforese de lipoproteínas. A ApoAIV e ApoAV foram quantificadas por ELISA. Foram encontradas alterações genéticas em 37 doentes, 3 não descritas (APOAIV Q359_E362, APOAV D332fsX336 e APOCIII 3269C>A). O índex com a alteração Q359_E362del apresentou valores normais de apo AIV (15.5 mg/dL) e o índex com a alteração D332fsX336 apresentou valores baixos de apo AV (74.5 ng/mL). Os doentes estudados apresentam valores elevados de CT (285 ± 83 mg/dL), c-LDL (189 ± 85 mg/dL), TG (310 ± 253 mg/dL), e apo CIII (15 ± 4 mg/dL) e valores reduzidos de c-HDL (45 ± 11 mg/dL), sem medicação. Os valores de apoAIV (17,5 ± 10,4 mg/dL) e apoAV (150 ± 135 ng/mL) encontram-se, na maioria dos casos, no intervalo normal assim como os valores de sdLDL (35 ± 18 mg/dL), no entanto alguns casos apresentam valores acima do cut-off para DCV (35 mg/dL). A análise de sdLDL por electroforese foi realizada em 11 doentes, 9 dos quais apresentaram um perfil aterogénico. O valor médio de ApoB destes doentes era de 94 ± 43 mg/dL, mas aproximadamente 70% dos doentes estavam medicados com terapêutica hipolimiante (estatinas e/ou fibratos). Cerca de 30% dos doentes apresentavam DCV prematura. Os resultados obtidos parecem indicar que alterações nos genes estudados influenciam o fenótipo da FCHL. Os níveis séricos de apo CIII encontram-se alterados nesta dislipidemia. Doentes com FCHL, apesar de estarem medicados, apresentam valores elevados de sdLDL, evidenciando o seu elevado risco cardiovascular. A caracterização bioquímica complementa a identificação genética e permite uma melhor avaliação do risco cardiovascular do doente bem como a escolha de uma terapêutica adequada.
- Hemoglobinopatias: Rastreio antenatalPublication . Miranda, Armandina
- Hipercolesterolemia Familiar em PortugalPublication . Bourbon, Mafalda
- Estudo Português de Hipercolesterolemia FamiliarPublication . Medeiros, A.M.; Alves, A.C.; Francisco, V.; Bourbon, M.A Hipercolesterolemia Familiar (FH) é uma doença autossómica dominante que se caracteriza, a nível clínico, por níveis elevados de colesterol LDL, levando ao aparecimento prematuro de doenças cardiovasculares (DCV). A nível genético esta doença caracteriza-se, principalmente, por mutações em três genes: LDLR, APOB e PCSK9. Estima-se que em Portugal existam cerca de 20 000 doentes com FH. A identificação clínica de FH é possível mas apenas o estudo molecular confirma a presença da doença. O Estudo Português de Hipercolesterolemia Familiar (EPFH) tem como objectivo principal identificar a causa genética da dislipidémia em doentes com diagnóstico clínico de FH. O EPHF recebeu desde 1999, para realização do estudo molecular, 486 casos-index com diagnóstico clínico de FH e 858 familiares. O estudo molecular é realizado em 3 fases. Fase I: Identificação de mutações nos genes APOB e LDLR. Fase II: Pesquisa de grandes rearranjos no gene LDLR por MLPA. Fase III: Pesquisa de mutações no gene PCSK9. A pesquisa de mutações nos genes APOB e PCSK9 é realizada por amplificação dos fragmentos a estudar e sequenciação directa. No gene LDLR os 18 exões são amplificados dos 18 exôes por PCR e analisados por DHPLC e sequenciação. Até à data foram identificados um total de 504 doentes com um defeito genético num dos três genes estudados: 3 doentes com mutação no gene PCSK9, 12 doentes com mutação no gene APOB e 438 doentes com mutação no gene LDLR (7 dos quais em homozigotia ou heterozigotia composta). No gene LDLR foram encontradas 89 mutações diferentes, que incluem 43 mutações missense,17 delecções/inserções, 6 nonsense, 12 mutações de splicing, 4 grandes delecções e 2 no promotor e 1no codão stop. As mutações mais comuns na população portuguesa são: p.A431T (11%), p.D224N (6,9%) e p.R406W (6,2%). Foram efectuados funcionais em algumas mutações de splicing e comprovou-se a sua patogeneicidade em 6 alterações (c.-135C>G; c.-190+4insTG; c.313+6T>C; c.818-2A>G; c.2389G>T (V776L); c.2547+1G>A). Foram também efectuados estudos funcionais para 5 alterações missense não descritas anteriormente (p.V429L, p.W490R, p.S648P, p.P685S e p.V859M), verificou-se que apenas a alteração p.V859M não é patogenica. No gene APOB foi identificada a mutação mais comum (p.Arg3527Gln) e também a mutação p.Tyr3560Cys. No gene PCSK9 foi encontrada uma única alteração, p.Asp374His. A FH esta sub-diagnosticada no nosso País, esforços têm de ser conduzidos para identificar estes doentes, ainda em idade jovem, de modo a que seja evitado o aparecimento da DCV prematura, e no caso mais extremo a morte prematura como observado em algumas famílias. O diagnóstico e aconselhamento genético da FH é importante para a correcta percepção e prevenção do risco familiar de DCV. O estudo molecular fundamenta a instituição de terapêutica farmacológica adequada e a adopção de um estilo de vida saudável reduzindo substancialmente o risco cardiovascular. Nas crianças e adolescentes o diagnóstico genético é ainda mais importante, uma vez que se sabe que o risco cardiovascular é elevado, mas evitável, se medidas preventivas forem colocadas em prática. O futuro passa pela prevenção em vez da resolução tardia das complicações cardiovasculares inerentes a esta patologia.
- Quantificação de quatro imunossupressores por cromatografia líquida com detecção por espectrometria de massa “tandem”Publication . Barreira, Maria JoãoA monitorização terapêutica dos imunossupressores no sangue é fundamental em doentes após o transplante de órgãos sólidos devido à sua estreita janela terapêutica e à sua elevada variabilidade intra e inter individual. O objectivo deste estudo é o de implementar um método rápido e simples, por cromatografia líquida com detecção por espectrometria de massa “tandem” (LC-MS/MS), para a determinação simultânea dos imunossupressores ciclosporina A (CsA), everolimus (Ever), sirolimus (Sir) e tacrolimus (Tac). Este método baseou-se num método desenvolvido pela AB Sciex, tendo sido efectuada a optimização das condições de preparação da amostra assim como a avaliação dos parâmetros de desempenho do método, utilizando para isso 6 calibradores e 3 controlos, contendo diferentes concentrações dos quatro imunossupressores, CsA, Ever, Sir e Tac. A avaliação da linearidade foi efectuada com base na aplicação de diversos testes estatísticos incluindo análise de resíduos, coeficientes de correlação, teste de RIKILT e teste de Mandel. Os resultados mostraram que o método é linear entre 48 e 1350 ng/mL para a Cs A, entre 2,6 e 44,9 ng/mL para Ever, entre 2,7 e 44,3 ng/mL para Sir e entre 2,5 e 39,7 ng/mL para Tac. Os limites de quantificação (LOQ) estimados com base no desvio padrão residual da curva de calibração são de 48 ng/mL para Cs A, 2,6 ng/mL para Ever, 2,7 ng/mL para Sir e 2,5 para Tac. Os estudos de repetibilidade foram efectuados utilizando três padrões de concentração baixa, média e alta, preparados de forma independente. Os valores obtidos para o desvio padrão relativo (RSD%) foram inferiores a 10% para CsA e Tac e inferiores a 15% para Ever e Sir. A exactidão do método tem vindo a ser avaliada através da participação nos ensaios de avaliação externa da qualidade organizados pelo UK NEQAS (United Kingdom National External Quality Assessement Scheme). Durante o presente ano os valores de “Bias” têm sido na mairitariamente inferiores a 20% esempre inferiores a 30%. Os valores de Z-score têm-se situado entre -2 e 2. Este método foi utilizado para determinar os níveis de everolimus em 35 amostras de sangue de doentes com transplante e os resultados mostram que em 60% das amostras analisadas as concentrações de everolimus se situam abaixo dos valores considerados como terapêuticos e em 2,8% dos casos os níveis sanguíneos de everolimus situam-se acima do intervalo de concentração terapêutica. O método de LC-MS/MS apresenta um bom desempenho analítico, permitindo analisar de forma rápida, específica e exacta os imunossupressores CsA, Ever, Sir e Tac, em amostras de sangue total, o que faz dele um método adequado para utilizar na monitorização terapêutica destes fármacos.
- Genetic basis of familial hypercholesterolaemiaPublication . Alves, A.C.; Bourbon, M.Familial hypercholesterolemia (FH) is a genetic condition characterized by a high cholesterol concentration in the blood. The most frequent causes of FH are inherited defects in the Low Density Lipoprotein Receptor gene (LDLR) but, in a small percentage of patients, mutations in the apolipoprotein B gene (APOB) and in the propotein convertase subtilisin/kexin type 9 gene (PCSK9) are also responsible for FH. These 3 genes are currently studied in the “Portuguese FH study”. From the 404 families with a clinical diagnosis of FH already studied only 48% of these have a mutation in one of the 3 studied genes, so other gene defects must exist to explain the cause of hypercholesterolemia in the remaining families. The first aim was the exclusion of previously unidentified LDLR and APOB gene defects, as well as the exclusion of mutations in LDLRAP1 and CYP7A1 genes in patients with possible recessive hypercholesterolemia. A second aim was the whole sequencing of APOB gene, in 65 index patients without mutations in LDLR or PCSK9 genes or in fragments of exon 26 and 29 of APOB gene, by pyrosequencing, in order to identify the genetic cause of the hypercholesterolemia in these patients. CYP7A1 and LDLRAP1 genes were analysed by PCR and direct sequencing. A pool of the 65 DNAs was sequenced by pyrosequecing method and a total of 227688 nucleotide reads were obtained, corresponding to a mean coverage of 35x/fragment/individual. No mutations were found in LDLRAP1 and CYP7A1 genes in 10 patients with possible recessive hypercholesterolemia. A total of 87 alterations were detected, being 27 described SNPs. From the 26 alterations detected, only 12 were found and 4 of these had not been previously described. After family studies only one alteration did not co-segregate in the family, providing further evidence that 3 of the alterations found can be mutations causing disease, but functional studies are required to prove pathogenicity. Patients, in whom it was not possible to find the genetic cause of the hypercholesterolaemia, will continue to be studied, since all show a severe clinical phenotype of FH.
- Identification of protein subnetworks implicated in Autism Spectrum Disorders (ASD)Publication . Correia, C.; Diekmann, Y.; Oliveira, G.; Pereira-Leal, J.B.; Vicente, A.M.
- Conhecimentos e hábitos alimentares considerando as recomendações para hipertensos medicados imigrantes e nativos seguidos nos cuidados de saúde e primários da Região de Lisboa: determinantes da adesão às recomendações de fruta, hortícolas e peixePublication . Cardoso, I.; Guerra, F.; Pinto, A.; Alarcão, V.; Fernandes, M.; Guiomar, S.; Nicola, P.; Rocha, E.
- Influence of LPL, APOAIV, APOAV, APOCIII and USF1 polymorphisms in a Portuguese population with clinical diagnosis of familial combined hyperlipidaemiaPublication . Santos, T.; Rato, Q.; Gaspar, I.M.; Bourbon, Mafalda