DGH - Posters/abstracts em congressos nacionais
Permanent URI for this collection
Browse
Browsing DGH - Posters/abstracts em congressos nacionais by Issue Date
Now showing 1 - 10 of 210
Results Per Page
Sort Options
- Molecular Characterization of the three Portuguese patients with Mucopolysaccharidosis IIICPublication . Coutinho, Maria Francisca; Lacerda, Lúcia; Ribeiro, Helena; Ferreira, Célia; Lopes, Lurdes; Prata, Maria João; Alves, Sandra
- Fragile X Syndrome: Genetic BackgroudsPublication . Loureiro, Joana; Marques, Isabel; Oliveira, Bárbara; Amorim, António; Santos, Rosário; Jorge, PaulaFragile X Syndrome (FXS) is the most frequent hereditary form of mental retardation, caused by an expansion of polymorphic [CGG] repeats in the 5’UTR region of the FMR1 gene; the molecular mechanism of this expansion is, however, still unknown. Based on [CGG] triplet number, three allele classes can be distinguished: normal sized-alleles (5-50 repeats); pre-mutation alleles (50-200 repeats) and the full mutation where alleles have an expansion of over 200 CGG repeats. Previous studies using Short Tandem Repeat (STR) haplotypes of mutant chromosomes in diverse populations revealed founder effects based on linkage disequilibrium between CGG repeats and flanking molecular markers.
- Fragile X Mental Retardation Protein: broadening the possibilities for studying Fragile X SyndromePublication . Oliveira, Bárbara; Marques, Isabel; Loureiro, Joana; Santos, Rosário; Jorge, PaulaThe presence of chromosomal fragility in locus FRAXA, located at Xq27.3, is directly related with Fragile X Syndrome (FXS), where the main symptoms include intellectual and emotional disabilities. The main cause of this monogenic disorder is the transcriptional silencing of the FMR1 gene, due to an expansion of more than 200 CGG repeats, found in the 5’-untranslated region, and its consequent hypermethylation which extends to the promoter region. The diagnostic complexity of FXS is proportional to the heterogeneity underlying this disease. In situations that strongly suggest a clinical diagnosis of FXS, but in which the repetitive region is not expanded, studying the presence of the encoded protein has proved to be very helpful as a complement to the molecular diagnosis. The Fragile X Mental Retardation Protein (FMRP), a selective RNA-binding protein that negatively regulates local protein synthesis in neuronal dendrites, may be detected applying specific antibodies either by immunocytochemistry or Western Blot analysis. The aim of the present work was to optimize such techniques, so as to complement the routine molecular procedures employed in prenatal and postnatal FXS diagnosis. In order to test the efficacy of the procedure, different types of biological samples were used, namely leukocytes from peripheral blood, human brain tissue, cultured amniocytes and chorionic villi. Additionally, slide preparation and detection method for immunocytochemistry, as well as protein isolation for Western Blot, were optimized resorting to several approaches. Both immunocytochemistry and Western Blot techniques allowed the detection of FMRP and were equally suitable. The advantages and disadvantages of the implementation of these techniques in terms of laboratory workflow and specimen type as well as in diagnostic and research context are discussed herein.
- Antagonistic Regulation of CFTR Cell Surface Expression by Protein Kinases WNK4 and Spleen Tyrosine KinasePublication . Mendes, A.I.; Matos, P.; Amaral, M.D.; Jordan, P.Members of the WNK (with no lysine (K)) subfamily of protein kinases regulate various ion channels involved in sodium, potassium and chloride homeostasis by either inducing their phosphorylation or regulating the number of channel proteins expressed at the cell surface. Here, we describe that WNK4 promotes the cell surface expression of the cystic fibrosis transmembrane conductance regulator (CFTR) in mammalian cells. The mechanism by which WNK4 acts on CFTR involves interaction with spleen tyrosine kinase (Syk), which we find to phosphorylate Tyr512 in the first nucleotide-binding domain (NBD) 1 of CFTR. The presence of WNK4 prevents the phosphorylation of NBD1 by Syk in vitro in a kinase-independent manner. In baby hamster kidney cells stably expressing CFTR, catalytically active Syk reduces while WNK4 promotes the cell surface expression of CFTR. This is shown by biotinylation of cell surface proteins, immunofluorescence microscopy and functional efflux assays. Mutation of Tyr512 to either glutamic acid or phenylalanine is sufficient to alter CFTR surface levels. Together, our results identify that Tyr512 phosphorylation is a novel signal regulating the prevalence of CFTR at the cell surface and describe an antagonistic role of WNK4 and Syk in this process.
- Protein kinase WNK2 regulates cell migration in malignant gliomasPublication . Moniz, S.; Martinho, O.; Reis, R.M.; Jordan, P.Malignant glioblastomas are the most common and lethal adult brain tumours, with patients dying within two years from diagnosis. Little is known about the molecular mechanisms underlying the formation and/or development of these tumours, which present a very invasive phenotype within the brain and are genetically heterogeneous and highly resistant to both chemo- and radio-therapies. Recently, the promoter region of the protein kinase WNK2 gene was found to be hypermethylated in 29 of 31 infiltrative gliomas and about 80% of meningiomas. We have previously described that the experimental depletion of WNK2 expression decreases RhoA activity whilst leading to increased Rac1 activity. Because RhoA/Rac1 activities are important for cell migration and glioblastomas are very invasive tumours, we tested the effects of WNK2 on wound-healing assays in glioma cell lines SW1088 and A172. SW1088 cells express endogenous WNK2 and we observed that wound closure was increased upon experimental depletion of endogenous WNK2. In contrast, A172 cells display complete promoter region methylation and WNK2 re-expression was found to decrease migration. Consistently, we observed an increase in Rac1 activity in SW1088 cells upon WNK2 down-regulation, but lower levels of active Rac1 in A172 cells stably expressing WNK2 cDNA when compared with an equivalent cell line stably transfected with the same empty vector. Our studies indicate that loss of WNK2 expression promotes Rac1 activation and may contribute to the highly invasive phenotype that glioblastomas present. We also observed that, in a panel of glioblastoma cell lines, WNK2 promoter methylation correlates with a marked deregulation in Akt, MEK1/2 and ERK1/2 activities, suggesting WNK2 may also be important for tumour cell survival and cell cycle progression.
- Exposição ao Fumo Passivo no Local de Trabalho: Biomarcadores de Genotoxicidade e SusceptibilidadePublication . Antunes, Susana; Vital, Nadia; Louro, Henriqueta; Gomes, Filomena; Penque, Deborah; Simões, Tânia; Silva, Maria JoãoApesar dos limites impostos ao fumo em locais públicos, ainda é permitido fumar nalguns bares/restaurantes, o que constitui um potencial risco para a saúde dos indivíduos expostos. Neste trabalho pretendeu-se analisar uma potencial associação entre exposição ocupacional ao fumo de tabaco ambiental(ETS) e indução de alterações genéticas, atendendo à influência da susceptibilidade genética individual. Estudaram-se 81 empregados de bares/restaurantes, 37 expostos e 44 não expostos a ETS. Caracterizaram-se os efeitos genotóxicos recorrendo ao ensaio do micronúcleo (MN) em linfócitos e em células do epitélio oral e ao ensaio do cometa em leucócitos. Paralelamente, avaliou-se a capacidade de reparação do DNA através da quantificação de lesões induzidas pelo SEM (Ethyl methanesulfonate) no DNA de leucócitos. Analisaram-se os polimorfismos em genes de metabolização e reparação de DNA através de PCR/RFLP. Relativamente aos biomarcadores de genotoxicidade, não se observaram diferenças significativas entre o grupo exposto a ETS e o controlo. Contudo, o estímulo com EMS induziu um número significativamente menor de lesões no DNA de leucócitos dos indivíduos expostos a ETS comparativamente aos não expostos, sugerindo uma melhor capacidade de reparação do DNA - resposta adaptativa. Evidenciou-se também a influência de alguns polimorfismos em genes de metabolização na frequência de MN em células do epitélio oral e de quebras de DNA em leucócitos. Em conclusão, este estudo revelou que apesar da exposição ocupacional a ETS em bares/restaurantes não ter provocado efeitos genotóxicos detectáveis, induziu uma possível resposta adaptativa em células dos indivíduos expostos, cujo potencial impacto na saúde ainda se desconhece.
- Análise de proteínas musculares por Western blot em doentes com Distrofia Muscular das Cinturas tipo 2A (LGMD2A)Publication . Maia, Nuno; Vieira, Emília; Santos, Rosário; Oliveira, Marcia E.Introdução: As Distrofias Musculares são um grupo de doenças musculares hereditárias, genotipicamente e fenotipicamente heterogéneo, envolvendo normalmente o músculo esquelético (1). Actualmente, estão identificados 18 genes associados a um subgrupo específico denominado Distrofias Musculares das Cinturas (LGMDs, limb-girdle muscular dystrophies), caracterizadas por fraqueza inicial da musculatura pélvica e escapular (2). Alterações no gene CAPN3 são responsáveis pelo fenótipo LGMD tipo 2A (LGMD2A), de transmissão autossómica recessiva (3), sendo esta uma das formas mais comuns (4). Este gene codifica a enzima citosólica calpaína 3 (CAPN3), expressa predominantemente no músculo esquelético e que pertence a uma família de proteases de cisteína não lissossomais dependentes de cálcio (5). Vários estudos demonstraram que a capacidade autolítica da CAPN3 é essencial para a activação e regulação da sua actividade proteolítica (6). A análise das proteínas musculares da maioria dos doentes com LGMD2A revela uma diminuição da expressão da CAPN3 comparativamente a músculos controlo. No entanto, um pequeno grupo desses doentes apresenta expressão normal da enzima, mas função autolítica deficiente (7). Objectivo: Dado o largo espectro de mutações detectadas nos doentes com diagnóstico molecular de LGMD2A realizado na UMOP, este trabalho visa complementar o estudo molecular, através da análise por Western blot das proteínas musculares, e tentar estabelecer uma relação fenótipo/genótipo. Material e Métodos: Foram utilizadas biópsias musculares de 9 doentes LGMD2A diagnosticados molecularmente na UMOP em estudos de expressão/ funcionais da CAPN3 e de outras proteínas musculares, por Western blot e densitometria. Resultados e Discussão: Não foi detectada expressão da CAPN3 em 5 amostras analisadas, sugerindo alterações ao nível da tradução da proteína. Foi verificada perda da função autolítica da CAPN3 em 2 doentes com expressão muscular da proteína. Devido à degradação generalizada do conteúdo proteico muscular verificado em algumas das biópsias estudadas, como resultado do acondicionamento inapropriado, não foi possível avaliar quantitativamente a expressão da CAPN3 e de outras proteínas musculares em todas as amostras. Por este facto, vão ainda ser realizados estudos de expressão do gene CAPN3, por PCR de tempo real, na tentativa de correlacionar todas as alterações observadas ao nível de DNA, RNA e proteína nos doentes estudados. Referências bibliográficas 1. Gaina G, Manole E, Bordea C, Ionica E. Analysis of calpain-3 in LGMD2A. Seria Stiintele Vietii (Life Sciences Series) 2008, 18:181-186. 2. Zatz M, Paula F, Starling A. The 10 autosomal recessive limb-girdle muscular dystrophies. Neuromuscular Disord 2003, 13:532-544. 3. Richard I, Broux O, Allamand V, Fougerousse F, Chiannilkulchai N, Bourg N, Brenguier L, Devaud C, Pasturaud P, Roudaut C, Hillaire D, Passos-Bueno MR, Zatz M, Tischfield JA, Fardeau M, Jackson CE, Cohen D, Beckmann JS. Mutations in the proteolytic enzyme calpain 3 cause limb-girdle muscular dystrophy type 2A. Cell, 1995, 81:27-40. 4. Fanin M, Nascimbeni AC, Fulizio L, Angelini C. The frequency of limb girdle muscular dystrophy 2A in northeastern Italy. Neuromuscular Disord 2005, 15(3):218-224. 5. Kramerova I, Beckmann JS, Spencer MJ. Molecular and cellular basis of calpainopathy (limb girdle muscular dystrophy type 2A). Biochimica et Biophysica Acta 2007, 128-144. 6. Groen EJ, Charlton R, Barresi R, Anderson LV, Eagle M, Hudson J, Koref MS, Straub V, Bushby KMD. Analysis of the UK diagnostic strategy for limb girdle muscular dystrophy 2A. Brain 2007, 130:3237-3249. 7. Fanin M, Nascimbeni AC, Tasca E, Angelini C. How to tackle the diagnosis of limb-girdle muscular dystrophy 2A. Eur J Hum Genet 2009, 17(5):598-603.
- Utilidade da Proteómica na Compreensão da Patogenia Molecular Proximal da Doença Cerebral AlcoólicaPublication . Peneda, Jorge; Charro, Nuno; L. Hood, Brian; Fonseca, Aidil; Hagenfeldt, Manuela; Miranda, Armandina; Zerimech, Farid; Gomes, Filomena; Neto, Domingos; P. Conrads, Thomas; Faria, Daniel; M Couto, Francisco; Penque, DeborahO avanço técnico instrumental no estudo da Proteómica permite aprofundar a interpretação da patogenia molecular de múltiplas doenças. Na doença degenerativa cerebral o mecanismo patogénico inflamatório crónico e imunológico tem sido consensual como será o caso deste órgão alvo preferencial estrutural e funcional em circuitos neuronais susceptíveis na doença alcoólica crónica. A perda da quiescência da impermeabilidade da barreira hemato-encefálica na doença alcoólica, torna acessível o estudo de marcadores moleculares proteicos no sangue periférico, com o apoio da bioinformática e cuidado escrutínio abrangente bibliográfico de proteínas selectivas individuais explícitas e, implícitas intervenientes directas/indirectas na disfunção bioquímica da nevróglia (glicose) e da transmissão neural. Objectivo: Valorização interpretativa no comportamento do complexo perfil proteómico electivo na patogenia molecular da doença cerebral sob efeito pró imunoinflamatório sistémico do metabolismo do etanol e endotoxémia na doença cerebral alcoólica (DCA). Material e métodos: Estudo longitudinal de 27 doentes com alcoolismo crónico activo (T0) e valorização comparativa com abstinência controlada (T1) terapêutica, psicologia de grupo e dieta standardizada em dois subgrupos: (A n=17) com elevados níveis relativos de indicadores de stresse oxidativo/nítrico versus (B n=10) com baixos níveis destes indicadores. Métodos laboratoriais – proteómica e bioquímica descrita pelos autores em 4th EuPA Scientific Meeting, A Proteomics Odyssey Towards Next Decades, Estoril, Portugal, October 23-27 2010:110 111. Resultados Sintéticos: Frequência de rácios A/B: 54.2% de 354 proteínas totais descriminadas têm influência directa/indirecta no SNC. Do total, 51.8% aumentadas e 53.1% diminuídas. Evolução de rácios sob abstinência em cada grupo: AT0/AT1 de 146 proteínas 40.4% diminuídas e 59.6% aumentadas; BT0/BT1 de 130 proteínas 50.8% diminuídas e 49.2% aumentadas; e ainda valorização funcional descriminada de proteínas individuais do total de 340. Conclusões: O stresse oxidativo/nítrico altera o perfil proteómico quantitativo e qualitativo sob consumo activo com indiciadores moleculares múltiplos para um estado global pró-inflamatório e pró-apoptoico (glicose e degenerescência neural). A reversibilidade clínica parcial é acompanhada por variações evolutivas quantitativas e qualitativas do perfil proteómico o que permite valorizar a importância do stresse oxidativo/nítrico como indução patogénica molecular proximal na degenerescência da (DCA).
- Tobacco smoke occupational exposure: biomarkers of biological damagePublication . Simões, Tânia; Torres, Vukosava; Pacheco, Solange; Louro, Henriqueta; Silva, Maria Joao; Charro, Nuno; Alexandre, Bruno; Vaz, Fatima; Penque, DeborahHigh concentration of toxic substances emanated from tobacco smoke in entertainment places such as restaurants, bars and nightclubs may compromise indoor air quality (IAQ) generating environments of likelihood health risk. Their employees, particularly those exposed to second-hand smoke, are at increased risk for developing chronic respiratory diseases such as chronic obstructive pulmonary disease (COPD), asthma and lung cancer. Objectives In this work, we aimed at evaluating relationships between occupational ETS exposure, biological damage (DNA or proteome alterations) and putative respiratory dysfunctions.