DAN - Dissertações de mestrado
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Browsing DAN - Dissertações de mestrado by advisor "Batista, Rita"
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- Caracterização da reação alérgica às bagas goji (Lycium barbarum)Publication . Teixeira, Sandrina; Batista, Rita; Igrejas, GilbertoLycium barbarum pertence à família taxonómica Solanaceae, que engloba outros alimentos, tais como o tomate e a batata. Os frutos desta planta, conhecidos na Europa como bagas goji, são ricos em nutrientes e contêm elevado teor em compostos bioativos, benéficos para a saúde quando consumidas diariamente, sendo, por isso, muitas vezes apelidados de “superalimento”. As bagas goji não são uma novidade na alimentação apesar de terem sido introduzidas na alimentação da população ocidental há relativamente pouco tempo, tendo vindo a ser utilizadas, cada vez mais, devido às suas propriedades nutricionais. No entanto, o consumo de bagas goji poderá ter efeitos negativos, tais como, a interação com anticoagulantes, nomeadamente a Varfarina, e o desenvolvimento de reação alérgica. Esta última, está relacionada com a potencial alergenicidade de proteínas presente nas bagas goji. Pretendeu-se com este estudo, caracterizar o proteoma das bagas goji e contribuir para um melhor conhecimento das proteínas envolvidas na reação alérgica. Para tal, numa primeira fase procedeu-se à otimização do método de extração proteica das bagas goji e à separação das suas proteínas por eletroforese bibimensional em gel desnaturante de poliacrilamida (2D SDS-PAGE), seguida de espectrometria de massa (MS/MS) para identificação das mesmas. Numa segunda fase, o objetivo foi tentar averiguar quais das proteínas identificadas por MS/MS são potencialmente alergénicas. Assim, nesta fase, devido à inexistência comercial de plasmas de indivíduos com alergia reportada às bagas goji, inicialmente realizou-se um ensaio de Western blot com plasmas de indivíduos alérgicos à batata e ao tomate de forma a averiguar se estes indivíduos reagiriam também às bagas goji. Após confirmação deste facto, procedeu-se à separação das proteínas das bagas goji por 2D SDS-PAGE, seguida de Western blot, com os mesmos plasmas, para identificação das proteínas envolvidas na reação alérgica. Neste estudo, conseguiram-se identificar significativamente 101 dos 180 spots retirados do gel de poliacrilamida. Essas identificações corresponderam a 36 proteínas diferentes, das quais 12 correspondem a proteínas potencialmente envolvidas na reação alérgica às bagas goji, uma vez que se ligaram a imunoglobulinas de tipo E (IgE) existentes nos plasmas dos indivíduos testados. Dos 12 tipos de proteínas às quais os indivíduos reagiram somente 7 corresponderam a proteínas potencialmente alergénicas já reportadas na base de dados Allergome. A utilização do software AlgPred (software que permite avaliar a potencial alergenicidade de uma proteína com base na sua sequência), com recurso à ferramenta Hybrid viii approach, para os 101 spots com identificação significativa, previu que 40 identificações correspondiam a potenciais alergénios e 61 a proteínas previsivelmente não alergénicas. Por fim, dos 12 tipos de proteínas que se ligaram às IgE presentes nos plasmas dos indivíduos testados oito são previsivelmente alergénicas pelo software AlgPred. Destas oito apenas cinco correspondem a proteínas já existentes na base de dados Allergome.
- Estudo da qualidade microbiológica de queijos da Beira Baixa fabricados com leite cruPublication . Mendonça, Rita; Batista, Rita; Chambel, LéniaOs queijos fabricados com leite cru fazem parte da cultura gastronómica portuguesa, sendo valorizados produtos de elevada qualidade microbiológica para garantir a segurança dos consumidores. Neste estudo avaliou-se a deteção e/ou contagem de Escherichia coli patogénica, Staphylococcus spp. coagulase positiva (CP), Salmonella spp. e Listeria monocytogenes, e de microrganismos indicadores de higiene (E. coli não patogénica e outras Listeria spp.) em 98 queijos da Beira Baixa fabricados com leite cru, e realizou-se a caracterização fenotípica e genotípica de isolados. Foram utilizados métodos baseados nas normas ISO e métodos para quantificação, deteção e identificação de bactérias (TEMPO®, VIDAS® e VITEK®, respetivamente). Fenotipicamente foram efetuados testes de suscetibilidade a antimicrobianos (E. coli e Salmonella spp.), testes da atividade hemolítica (E. coli) e teste de serotipagem por aglutinação (Salmonella spp.). Genotipicamente realizaram-se ensaios de PCR multiplex (pesquisa de genes específicos de E. coli patogénica intestinal) e sequenciação total do genoma (E. coli, Listeria spp. e Salmonella spp.), com deteção de genes de virulência e de resistência a antimicrobianos (E. coli e Salmonella spp.), bem como análise de clusters (E. coli e Listeria spp.). Detetou-se a presença de E. coli, Staphylococcus spp. CP, L. monocytogenes, Listeria innocua e Salmonella spp. em 73,5%, 63,3%, 4,1%, 4,1% e 1,0% das amostras, respetivamente. Não foram detetadas enterotoxinas estafilocócicas. Foram detetados três isolados de E. coli patogénica extraintestinal (ExPEC), um hemolítico e dois resistentes a múltiplos antimicrobianos (Ampicilina, Cloranfenicol, Sulfametoxazol, Tetraciclina), ST (sequence type) 14755, ST155 e ST362, respetivamente; um isolado de Salmonella Duisburg (ST4046) suscetível aos antimicrobianos testados e com dois genes associados a resistências; quatro isolados de L. monocytogenes (ST1, ST5, ST7) e quatro isolados de L. innocua (ST492, ST603). A contaminação encontrada poderá estar relacionada com a não adesão às boas práticas de higiene e segurança dos alimentos ao longo do processo de fabrico.