DAN - Dissertações de mestrado
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Browsing DAN - Dissertações de mestrado by advisor "Alves, Artur Jorge da Costa Peixoto"
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- Campylobacter: Impacte na saúde humana e segurança alimentarPublication . Amoroso, Ana Rita Vaz; Alves, Artur Jorge da Costa Peixoto; Lopes, Teresa TeixeiraCampylobacter é a causa mais frequente de gastroenterite bacteriana na Europa. Ao contrário de outras doenças zoonóticas, a incidência europeia de infeções por Campylobacter aumentou na última década. Das diversas espécies de Campylobacter são as termófilas as mais frequentemente associadas a infeção humana, nomeadamente Campylobacter jejuni, responsável por cerca de 80% a 90% dos casos de campilobacteriose, seguida por Campylobacter coli. A maneira mais frequente de um indivíduo se infetar com Campylobacter é através do consumo de alimentos contaminados principalmente aves, sendo a carne de frango apontada como a principal fonte de campilobacteriose. A deteção de Campylobacter em alimentos e animais é geralmente baseada em cultura. Métodos moleculares, Reação em Cadeia da Polimerase (PCR) e Matrix Assisted Laser Desorption Ionisation Time of Flight Mass Spectrometry (MALDI-TOF-MS), são usados para identificação das espécies. O presente projeto teve quatro objetivos. O primeiro consistiu em validar uma metodologia para detetar, em amostras de carne de frango e em esfregaços de superfícies de embalagens que acondicionavam carne de frango, a presença de C. jejuni e C. coli no meio de enriquecimento, por uma reação em cadeia da polimerase (Screening-PCR) baseada na amplificação do gene mapA de C. jejuni e do gene ceuE de C. coli. As amostras, após submetidas a um enriquecimento, foram isoladas em meios seletivos para deteção e posterior caracterização do microrganismo alvo, segundo a ISO 10272-1:2017. O segundo objetivo consistiu em validar a metodologia Screening-PCR em pools de amostras de carne de frango e em pools de esfregaços de superfícies de embalagens. Pretendeu-se ainda à monitorização da presença de Campylobacter em carne de frago no retalho e na superfície exterior das embalagens onde a carne de frango se encontrava acondicionada. A monitorização de embalagens é importante para avaliar o risco de contaminação pelo contacto com as mãos e superfícies entre as quais as de géneros alimentícios. As amostras foram selecionadas por conveniência tendo sido recolhidas em supermercados e talhos na região norte de Portugal. Foram recolhidas amostras de carne de frango (n=60) e superfícies de embalagens contendo carne de frango (n=63). A metodologia de Screening-PCR do meio de enriquecimento não detetou falsos negativos, tendo o resultado sido concordante com a deteção de Campylobacter de acordo com a ISO 10272-1:2017 em 96% das amostras ensaiadas. Em 4% das amostras foi detetada a presença de genes para C. jejuni e/ou C. coli por PCR no caldo de enriquecimento, mas não foi possível isolar essas estirpes. A metodologia de PCR evidenciou a dificuldade do isolamento de mais de uma espécie na mesma amostra. A monitorização da presença de Campylobacter em 10 gramas de carne de frango e em embalagens de carne de frango colocadas no retalho permitiu detetar a presença respetivamente em 58% e 27% das amostras ensaiadas. Foi detetada a presença de C. jejuni em 88% e C. coli em 25% das amostras positivas para Campylobacter spp. Nas amostras positivas no Screening-PCR para ambas as espécies, não foi possível isolar as duas espécies em 81% das amostras. Estes números mostram a importância de consciencializar a população dos cuidados necessários de higiene na manipulação de carne de frango, na separação dos géneros alimentícios crus e das respetivas embalagens de alimentos que se encontram prontos para sere consumidos, bem como dos que não vão ter um processo térmico e das superfícies utilizadas no seu processamento. A presente dissertação apresenta uma metodologia que rapidamente diferencia os casos negativos dos prováveis positivos, sendo só nestes, necessário prosseguir o ensaio para confirmação da presença de Campylobacter spp. por isolamento de estirpes. A utilização de pools de amostras foi validada o que permitiu diminuir gastos e aumentar número de amostras a ser testadas por reação, em futuros estudos de monitorização. Ficámos cientes que a identificação de espécies de Campylobacter presentes nas amostras terá de ser realizada num maior número de colónias isoladas do que as 5 estabelecidas para a deteção do género Campylobacter. As estirpes isoladas neste estudo poderão ser utilizadas em estudos de avaliação de resistência de Campylobacter a antimicrobianos, pesquisar fatores de virulência, comparar com estirpes isoladas em humanos, animais e no ambiente, entre outros estudos que irão ajudar ao conhecimento da epidemiologia da campilobacteriose e facilitar a gestão do risco.