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DDI - Dissertações de mestrado

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http://hdl.handle.net/10400.18/25

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Browsing DDI - Dissertações de mestrado by Author "Graça, Rafael"

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  • Evolução da resistência aos antibióticos em estirpes isoladas de diferentes reservatórios
    Publication . Graça, Rafael; Caniça, Manuela; Dias, Deodália
    A resistência aos antibióticos é um problema global e atual. O uso e mau uso de antibióticos não só em medicina humana e veterinária, mas também no ambiente, são fatores responsáveis pela emergência e disseminação de bactérias multirresistentes. A difusão das β-lactamases de espectro alargado (ESBL) constitui o principal mecanismo de resistência às cefalosporinas de 3ª geração em bactérias de Gram-negativo. Atualmente, as ESBL, particularmente as produtoras de CTX-M, têm emergido em diferentes reservatórios (animal, homem e ambiente). A produção de CTX-M, concomitantemente com a resistência a outras classes de antibióticos, ou mesmo por coprodução de outras β-lactamases (como as carbapenemases), tem constituído uma forma das bactérias se tornarem multirresistentes. No sentido de avaliar a evolução da resistência aos antibióticos em estirpes de Escherichia coli isoladas de diferentes reservatórios, este trabalho teve como objetivos específicos: a) investigar a diversidade das β-lactamases produzidas por 68 isolados de origem humana e animal e avaliar a sua suscetibilidade às diferentes classes de antibióticos; b) caracterizar a estrutura-função da nova enzima CTX-M-166 e estudar as suas consequências fenotípicas. Para alcançar estes objetivos, foi utilizada uma combinação de métodos fenotípicos, de biologia molecular e bioquímicos. A caracterização molecular dos mecanismos de resistência permitiu identificar uma grande diversidade de β-lactamases: penicilinases (TEM-1 e OXA-tipo); ESBLs da família CTX-M [CTX-M-1, CTX-M-14, CTX-M-15 (mais prevalente), CTX-M-27, CTX-M-32 e CTX-M-166 (nova variante)], TEM (TEM-52) e SHV (SHV-12); resistentes aos inibidores (TEM-30/IRT-2); e AmpCs plasmídicas (CMY-2 e DHA-1). Foram também identificados genes plasmídicos de resistência às fluoroquinolonas: aac(6’)-Ib-cr e qnrB 19. Dos 68 isolados analisados, 75% revelaram ser multirresistentes. A determinação das constantes cinéticas da CTX-M-166, identificada num isolado de origem animal, permitiu verificar uma diminuição na eficiência catalítica (kcat/Km), em comparação com a CTX-M-1. Contudo, a substituição aminoacídica Ala120Val contribuiu para o aumento da afinidade (Km) para a penicilina G, piperacilina, cefotaxima e ceftiofur, sendo este último antibiótico exclusivamente utilizado em medicina veterinária. Em conclusão, este estudo evidenciou uma grande diversidade de β-lactamases em isolados de E. coli de vários reservatórios, e uma elevada prevalência de multirresistência. Contribuiu ainda para uma melhor compreensão da evolução das propriedades catalíticas das enzimas CTX-M.
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