DGH - Dissertações de mestrado
Permanent URI for this collection
Browse
Browsing DGH - Dissertações de mestrado by Author "Brito, Francesca"
Now showing 1 - 1 of 1
Results Per Page
Sort Options
- Suppression of nonsense mutations as a therapeutic approach to treat genetic diseasesPublication . Brito, Francesca; Romão, Luísa; Crespo, Ana[PT] Algumas das mutações que ocorrem em células somáticas ou na linha germinal podem resultar na formação de codões de terminação prematura da tradução (CTPs ou codões nonsense). Um terço das mutações associadas a doenças genéticas resulta na produção de CTPs. Em geral, a introdução dum CTP num transcrito induz a terminação prematura da tradução e a activação do mecanismo de decaimento do mRNA mediado por mutações nonsense (nonsense-mediated mRNA decay; NMD). O NMD é um mecanismo de controlo de qualidade que impede a produção de proteínas truncadas na extremidade C-terminal tóxicas para a célula. No decorrer dos últimos anos, tem sido desenvolvida uma nova terapia, designada como terapia de supressão, que utiliza compostos de baixo peso molecular para induzir a maquinaria de tradução a alterar um CTP para um codão sense. O objectivo da terapia de supressão é estimular a capacidade de competição de tRNAs aminoacil com o complexo de terminação para a ligação ao CTP no local A do ribossoma, de forma a suprimir especificamente a terminação em CTPs e não em codões de terminação naturais. Embora a talassémia seja uma das doenças genéticas mais comuns e as mutações nonsense no gene da beta-globina (β-globina) estejam muito frequentemente associadas à beta-talassémia (β-talassémia), a utilização da terapia de supressão nestes casos ainda não foi investigada de forma detalhada. Resultados preliminares obtidos pelo nosso laboratório indicam que o aminoglicósido G418 tem a capacidade de suprimir uma mutação nonsense no codão 39 do mRNA da β-globina, em células eritróides em cultura. De forma a confirmar o princípio de que a terapia de supressão pode restaurar os níveis de β-globina, testámos se o composto G418 tem a capacidade de induzir níveis significativos de supressão em células HeLa transfectadas com plasmídeos que contêm o gene da β-globina humana normal (βWT) ou o equivalente com mutação nonsense no codão 39 (β39). Segundo os resultados obtidos, há um ligeiro aumento nos níveis de transcrito β39 o que pode ser indicador de um possível efeito da droga. Como não nos foi possível verificar o efeito da droga nos níveis de proteína é necessário trabalho futuro para avaliar o seu efeito nos níveis de expressão proteica.