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Publicação

Validation of next generation sequencing technology in the identification of complex and rare cases of hemoglobinopathies

2025-12-03Recurso educativo Acesso aberto
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datacite.subject.fosCiências Naturais
datacite.subject.fosEngenharia e Tecnologia
datacite.subject.sdg03:Saúde de Qualidade
dc.contributor.authorAntunes, Mariana
dc.date.accessioned2026-03-09T16:21:19Z
dc.date.available2026-03-09T16:21:19Z
dc.date.issued2025-12-03
dc.description.abstractAs hemoglobinopatias estão entre as doenças genéticas mais frequentes no mundo e podem representar um desafio ao diagnóstico devido à sua elevada heterogeneidade molecular e clínica. Em Portugal, assim como em outros países europeus, a sua prevalência e espectro mutacional têm vindo a aumentar devido a fluxos migratórios recentes. As abordagens tradicionais de diagnóstico combinam ensaios hematológicos, bioquímicos e moleculares direcionados. Estes últimos, por serem dirigidos a genes específicos, podem não detetar genótipos raros ou complexos. Neste trabalho foram analisadas 40 amostras anonimizadas de hemoglobinopatias através do painel Devyser Thalassemia versão 1 (v1) de sequenciação de nova geração (NGS) e equipamento MiSeq (Illumina). Foram identificadas 639 alterações genéticas, incluindo 622 variantes de nucleótido único (SNVs) e 17 variações no número de cópias (CNVs), correspondentes a 77 variantes distintas em seis genes e regiões regulatórias. Sempre que necessário, os resultados do NGS foram validados por técnicas moleculares convencionais. Um subconjunto de casos complexos foi ainda reanalisado com o kit Devyser Thalassemia v2. Nos 40 casos identificaram-se 37 variantes distintas clinicamente relevantes: os métodos tradicionais detetaram 35, enquanto o kit NGS v1 identificou 31, falhando sobretudo variantes de δ- e γ-globina devido a cobertura incompleta dos respetivos genes. As discrepâncias foram resolvidas com o kit NGS v2, que alcançou concordância total com as metodologias tradicionais. A avaliação do desempenho diagnóstico entre o kit NGS v1 e os métodos tradicionais revelou elevada sensibilidade e especificidade com concordância substancial para SNVs (κ = 0,65) e quase perfeita para CNVs (κ = 0,95). A utilização da tecnologia de NGS nestes 40 casos permitiu a deteção de três deleções provavelmente novas, localizadas no agrupamento génico da β-globina e associadas a formas de γ-, δ- e δβ-talassemia. Para além disso, permitiu desvendar a base molecular de vários casos invulgares, incluindo uma tripla hemoglobinopatia que mimetizava fenotipicamente a variante Hb C-Harlen. Este trabalho demonstra o valor acrescentado do NGS na caracterização dos casos complexos de hemoglobinopatias. A cobertura alargada do kit Devyser Thalassemia v2 reforça o seu papel como ferramenta de diagnóstico molecular e investigação, possibilitando a deteção de múltiplas alterações, em diferentes genes e regiões regulatórias, e fornecendo informação útil para a gestão clínica e o aconselhamento genético.por
dc.identifier.urihttp://hdl.handle.net/10400.18/11260
dc.language.isopor
dc.peerreviewedyes
dc.rights.urihttp://creativecommons.org/licenses/by/4.0/
dc.subjectNGS
dc.subjectHemoglobinopatias
dc.subjectVariantes Genéticas
dc.subjectHemoglobinopathies
dc.subjectDoenças Genéticas
dc.titleValidation of next generation sequencing technology in the identification of complex and rare cases of hemoglobinopathieseng
dc.typelearning object
dspace.entity.typePublication
oaire.citation.titleApresentação no âmbito do Seminário DGH, INSA, 3 dezembro 2025
oaire.versionhttp://purl.org/coar/version/c_970fb48d4fbd8a85

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