Browsing by Author "Fonseca, Pedro"
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- Avaliação externa da qualidade e acreditação do diagnóstico molecular da alteração JAK2: p.Val617Phe em neoplasias mieloproliferativasPublication . Silva, Elizabeth; Fonseca, Pedro; Theisen, Patrícia; Isidro, Glória; Vieira, Luís; Gonçalves, JoãoA Qualidade no diagnóstico molecular em genética humana é uma presença constante na rotina da nossa Unidade. A participação em programas de Avaliação Externa da Qualidade (AEQ), nomeadamente no United Kingdom National External Quality Assessment Service for Leucocyte Immunophenotyping (UK-NEQAS LI), é fundamental para manter o laboratório atualizado a nível das recomendações sobre as boas práticas em diagnóstico molecular, permitindo também a comparação do desempenho com outros laboratórios europeus e melhorar os relatórios dos testes genéticos. A nossa Unidade participa desde 2007 no programa de AEQ do UK-NEQAS LI para a deteção da alteração JAK2:p.Val617Phe (V617F), essencial no diagnóstico de neoplasias mieloproliferativas. Neste programa de AEQ, realizado três vezes por ano, são fornecidas amostras de linhas celulares liofilizadas para avaliação da presença/ausência da referida alteração. Os resultados dos ensaios e os detalhes da metodologia utilizada, são submetidos anonimizados à entidade organizadora. Desde o início da nossa participação nesta AEQ até 2018, foram analisadas 57 amostras. Destas, a alteração estava presente em 40 amostras e ausente em 17, sem falsos positivos ou falsos negativos. Os resultados todos validados pela entidade organizadora da AEQ, para além de confirmarem a reprodutibilidade, representatividade e repetibilidade para este teste genético, permitem validar anualmente a metodologia usada garantindo a sua especificidade e sensibilidade. Em conformidade com as recomendações específicas da Organização para a Cooperação e Desenvolvimento Económico (OCDE) para controlo de qualidade no diagnóstico genético molecular, possuímos desde 2018 acreditação para a pesquisa da alteração JAK2: p.Val617Phe (V617F), atribuída pelo Instituto Português de Acreditação (IPAC) no âmbito da norma ISO 15189. A acreditação ao abrigo desta norma é exigente, contribui para melhorar os testes genéticos na sua globalidade, pois compreende não só requisitos técnicos, como também requisitos de gestão. Esta acreditação contribui para melhorar a qualidade laboratorial a vários níveis, confere credibilidade, competência técnica e confiança. A acreditação e a participação na AEQ em causa, contribuem para melhorar o diagnóstico molecular dos doentes, para reduzir tempos de resposta, refletindo-se numa melhor vigilância e tratamento dos doentes.
- Hemocromatose hereditária associada ao gene HFE: resultados do diagnóstico molecular, correlação genótipo-fenótipo e importância da qualidade laboratorialPublication . Fonseca, Pedro; Loureiro, Pedro; Gomes, Susana; Faustino, Paula; Gonçalves, JoãoA hemocromatose hereditária (HH) associada ao gene HFE, dado ser uma doença autossómica recessiva com penetrância incompleta, deve obedecer a uma estratégia de análise molecular que compreenda, em primeiro lugar, a pesquisa das alterações moleculares que ocorrem mais frequentemente no referido gene (p.H63D e p.C282Y). Deve dar-se prioridade à pesquisa da alteração p.C282Y já que esta, quando presente em homozigotia, não havendo outros fatores de risco associados, permite confirmar a doença em indivíduos com fenótipo clínico sugestivo de HH e/ou apresentam biomarcadores séricos indicadores de sobrecarga em ferro, nomeadamente saturação da transferrina e ferritina elevadas. Neste trabalho, o estudo molecular de 1838 doentes com parâmetros clínicos e/ou bioquímicos relacionados com HH, revelou a presença de homozigotia para a alteração p.C282Y em 4% dos indivíduos analisados, valor muito acima do estimado para a população em geral (~0,09%) enquanto que a homozigotia para p.H63D foi de 7,9%, o qual corresponde a duas vezes o valor previsto para a população em geral (~4%). Ou seja, estes resultados, sustentam que a referida pesquisa, antecedida de aconselhamento genético, deverá ser realizada para confirmar (em indivíduos com índices bioquímicos de sobrecarga em ferro) a suspeita de HH. O diagnóstico molecular antecedido da ocorrência dos sintomas graves da HH, permite antecipar a vigilância clínica, prevenindo a progressão da doença para as manifestações mais graves que incluem, por exemplo, cirrose e carcinoma hepatocelular. Complementarmente, valoriza-se também a importância da participação dos laboratórios em ensaios de avaliação externa da qualidade, o que permite melhorar o desempenho dos mesmos no âmbito da genotipagem, interpretação de resultados e qualidade dos relatórios.