GENETIC STUDY OF TOXOPLASMA GONDII STRAINS ISOLATED FROM HUMANS AND ANIMALS

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Molecular and virulence characterization of Toxoplasma gondii strains isolated from humans in Portugal

Publication . Vilares, Anabela; Gargaté, Maria João; Ferreira, Idalina; Martins, Susana; Gomes, João Paulo

Toxoplasma gondii is an apicomplexan parasite responsible for toxoplasmosis which infects all warm-blooded vertebrates, including mammals and birds. The majority of studies conducted in Europe have revealed that more than 80 % of strains isolated from human infections belong to genotype II, whereas genotypes I and III are responsible for a small number of cases. Atypical and recombinant strains are generally associated with more severe infections. In Portugal, there is a lack of data concerning genetic diversity as the classical typing studies in humans have never been performed. We aimed to determine the Sag2 and microsatellite-based (TUB2, TgM-A, W35, B17, B18) genotypes of T. gondii isolated from humans in Portugal, as well as to study their virulence in mice. We analyzed 48 strains from congenital and acquired toxoplasmosis collected during the last two decades. Sag2-based genotyping of T. gondii was achieved in all 48 strains where 35 (73 %) were classified as type II and 13 (27 %) were type I. The multilocus PCR of five microsatellites allowed the classification of 10 strains (21 %) as recombinant strains that had been previously identified as type II or I by Sag2 typing. Seven out of the 48 strains, including three type I, three recombinant, and one type I, were virulent in mice. This study constitutes the first evidence of recombinant strains circulating in Portugal in humans from congenital infection, highlighting the need for a better evaluation of these strains as their phenotype is still barely understood.

2017-03Journal article

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Sequenciação de nova geração: o paradigma dos parasitas

Publication . Vilares, Anabela; Borges, Vítor; Sampaio, Daniel; Vieira, Luís; Ferreira, Idalina; Martins, Susana; Reis, Tânia; Gomes, João Paulo; Gargaté, Maria João

Toxoplasma gondii é um protozoário intracelular obrigatório responsável pela Toxoplasmose, infetando diferentes espécies incluindo o Homem. Na Europa e no Norte da América, T. gondii tem uma população clonal constituída por tipo I, II, III. No entanto, estudos recentes têm descrito uma maior diversidade genética, com a identificação de estirpes recombinantes e atípicas mais virulentas. Em Portugal, o conhecimento dos genótipos circulantes de T. gondii é limitado. Neste sentido, estudou-se a diversidade genética de 68 estirpes, incluindo 51 estirpes de T. gondii isoladas em Portugal, a estirpe de referência RH e 16 outras estirpes de referência. Neste estudo realizou-se a genotipagem clássica (Sag2), PCR multiplex de 5 microssatélites e uma combinação de sequenciações por Sanger e NGS de oito loci responsáveis pela virulência. A genotipagem clássica (tipo I, II, III) foi obtida em 100% das estirpes e mostrou que a maioria das estirpes isoladas em Portugal eram do tipo II (70,6%; 36/51) e as restantes 15 do tipo I. A análise de microssatélites por PCR multiplex aumentou o poder discriminatório em apenas mais um tipo identificado. Contudo, quando se adicionaram as metodologias de sequenciação por Sanger e NGS o poder discriminatório aumentou para 36 tipos diferentes. A combinação destas metodologias (Sanger/NGS) permitiram a identificação de uma estrutura mosaico nos isolados de T. gondii em Portugal, não conseguida anteriormente por qualquer uma das outras tecnologias utilizadas.

2018-12Journal article

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