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- Mitochondria proteome profiling: a comparative analysis between gel- and gel-free approachesPublication . Ferreira, R.; Rocha, H.; Almeida, V.; Padrão, A.L.; Santa, C.; Vilarinho, L.; Amado, F.; Vitorino, R.Mitochondrial proteomics emerged aiming to disclose the dynamics of mitochondria under various pathophysiological conditions. In the present study we investigated the relative merits of gel-based (2DE and SDS-LC) and gel-free (2D-LC) protein separation approaches and protein identification algorithms (Mascot and Paragon) in the proteome profiling of mitochondria isolated from cultured fibroblasts, a sample traditionally used for diagnosis purposes. Combining data retrieved from 2DE, 2D-LC and SDS-LC and search methods, a total of 696 non-redundant proteins were identified. An overlap of only 19% between the proteins identified by the three different methods was observed when Mascot and Paragon were used. Regarding protein ID, a consistency in the number of identified proteins per sample was noticed for 2DE approach. Independent of the methodological approach chosen, it was noticed that the predominance in mitochondria of hydrophilic proteins with 20-50 kDa and pI 5-6 and 8-9; however, 2D-LC and SDS-LC allowed the enrichment of proteins with a mass below 30 kDa and of basic proteins with pI values above 8. In conclusion, data from the present study highlight the power of integrating different separation technologies and protein identification algorithms.
- Perfil Terapêutico da Hipertensão na Rede Médicos Sentinela - 12 Anos DepoisPublication . Souto, Diana; Simões, José Augusto; Torre, Carla; Mendes, Zilda; Falcão, Isabel Marinho; Ferreira, Fernando; Miranda, Ana da Costa; Dias, Carlos MatiasObjectivos: Determinar o perfil terapêutico da hipertensão arterial na Rede de Médicos Sentinela e comparar os resultados obtidos, 12 anos após a realização do primeiro estudo. Tipo de estudo: Estudo transversal. Local: Rede de Médicos Sentinela de Portugal. População: Doentes hipertensos com mais de 18 anos das listas dos médicos sentinela que se deslocaram à consulta entre 7 de Junho de 2010 e 31 de Dezembro de 2010. Métodos: Os médicos sentinela participantes recolheram informação dos doentes hipertensos, informação essa que contemplou a caracterização sociodemográfica, a caracterização da patologia (data de diagnóstico, forma de hipertensão, danos em órgão-alvo e morbilidade associada) e a caracterização da terapêutica instituída. Resultados: Foram incluídos 616 hipertensos no estudo. Comparativamente ao primeiro estudo (1998), verificou-se um ligeiro aumento da idade média dos participantes (62,0 anos em 1998 vs 64,3 anos em 2010), mantendo-se o predomínio do sexo feminino. A duração média da hipertensão desde o momento do diagnóstico aumentou significativamente (p < 0,0001). Aproximadamente metade dos hipertensos apresentou danos em órgãos-alvos em ambos os momentos, sendo a doença cardíaca o dano mais frequente. As patologias associadas mais frequentes foram a dislipidemia, a hiperuricemia e a diabetes. De 1998 para 2010, a proporção de doentes em monoterapia diminuiu (47,6% vs 30,3%), sendo os inibidores da enzima da conversão da angiotensina a classe terapêutica mais frequentemente prescrita em monoterapia nos dois momentos. Em 1998, o padrão de tratamento mais frequentemente prescrito foram inibidores da enzima da conversão da angiotensina em monoterapia (24,3%) e em 2010 foi a associação de antagonistas dos receptores da angiotensina + diuréticos tiazídicos (15,4%). Conclusões: Os fármacos que actuam no eixo renina-angiotensina-aldosterona foram, neste estudo, os mais frequentemente prescritos em ambos os momentos, tanto em monoterapia como em politerapia. O número de anti-hipertensores prescritos diferiu entre os dois momentos de acordo com a existência e tipo de comorbilidade
- Occurrence of extended-spectrum β-lactamases among isolates of Salmonella enterica subsp. enterica from food-producing animals and food products, in PortugalPublication . Clemente, Lurdes; Manageiro, Vera; Ferreira, Eugénia; Jones-Dias, Daniela; Correia, Ivone; Themudo, Patrícia; Albuquerque, Teresa; Caniça, ManuelaA total of 1120 Salmonella spp. isolates, recovered from poultry, swine and food products of animal origin (bovine, swine and poultry) over the period of 2009-2011, were investigated in order to determine their serotype, susceptibility to a panel of eleven antimicrobials (A, ampicillin; Ct, cefotaxime; Cp, ciprofloxacin; Tm, trimethoprim; Su, sulfamethoxazole; C, chloramphenicol; S, streptomycin; G, gentamicin; T, tetracycline; NA, nalidixic acid; Fl, florfenicol), and the presence of resistance determinants of extended-spectrum cephalosporins. Overall, Salmonella Enteritidis was the most common serotype in all three animal species. In 618 isolates of poultry, 32.8% comprised S. Enteritidis, 18.3% Salmonella Havana and 16.5% Salmonella Mbandaka; in 101 isolates of pigs, 21.8% comprised Salmonella Rissen and Salmonella Typhimurium, 10.9% Salmonella Derby and Salmonella London. Salmonella I 4,[5],12:i:- was the most common serotype recovered from pork and beef food products comprising 32.6% and 30% of isolates respectively, followed by S. Rissen (26% and 24%) and S. Typhimurium (18.2% and 19%), respectively. In poultry products, S. Enteritidis was the most frequent serotype (62.7%), followed by S. Mbandaka (10.2%) and S. Derby (8.5%). Susceptibility profiles differed according to the origin of the isolates. Five multidrug resistant isolates (0.45%) were further characterized as extended-spectrum β-lactamase (ESBL) producers. Polymerase chain reaction and sequencing of the amplicons confirmed the presence of bla(CTX-M-1) (n = 2), bla(CTX-M-14) (n = 1), bla(CTX-M-15) (n = 1) and bla(CTX-M-32) (n = 1); bla(SHV-12) and bla(TEM-1) genes were also detected in two isolates of S. I 4,[5],12:i:-. Four isolates, two S. Havana and two S. I 4,[5],12:i:-, carried class 1 integrons and in three, two S. I 4,[5],12:i:- and one S. Havana, ISEcp1 was identified associated to bla(CTX-M-1), bla(CTX-M-32) and bla(CTX-M-14) genes. Additionally, in one S. I 4,[5],12:i:- isolate, orf477 was identified linked to bla(CTX-M-32). No plasmid mediated quinolone resistance-encoding genes were detected. Here, we report for the first time the presence of bla(CTX-M) genes in Salmonella enterica subsp enterica isolates recovered from poultry and food products of swine origin, in Portugal.
- Especiação de Arsénio em Produtos AlimentaresPublication . Gueifão, Sandra; Coelho, Inês; Castanheira, IsabelA importância da especiação química em alimentos prende-se com o facto de ser hoje sobejamente reconhecido, que quer a toxicidade quer a biodisponibilidade de um elemento são dependentes da forma química em que este se apresenta. No caso particular do arsénio, as espécies inorgânicas são mais tóxicas que as orgânicas. Algumas espécies orgânicas são inclusive consideradas não tóxicas como é o caso da arsenobetaina (AsB) e arsenocolina (AsC). A acoplação de um cromatógrafo líquido de alta resolução (HPLC) a um espectrómetro de massa com plasma indutivo acoplado (ICP-MS) permite aliar o poder de separação do primeiro à elevada selectividade e sensibilidade do segundo, sendo, por isso, a técnica de eleição para a especiação química. Pretende-se desenvolver um método em que, recorrendo à técnica hifenada de HPLC-ICP-MS, seja possível identificar e quantificar as espécies químicas de arsénio presentes em produtos alimentares. Foram testadas diferentes condições de sonicação, temperatura, duração da extracção e natureza do solvente. Inicialmente, o desenvolvimento do método incidiu sobre a análise da concentração total de arsénio presente nas amostras, tendo sido escolhida a combinação de extracção que apresentou as melhores taxas de recuperação. A separação das espécies foi feita utilizando uma coluna de troca aniónica, HAMILTON-PRP X-100, que permitiu separar satisfatoriamente as quatro espécies de arsénio para as quais estavam disponíveis padrões (arsenobetaina (AsB), dimetilarsénico (DMA), arsenito (AsIII) e arseniato (AsV)). A fase móvel foi escolhida com base na literatura científica e adaptada às condições do laboratório. Para assegurar que não ocorreu interconversão das espécies, durante os ensaios foram feitos “spikes” individuais das espécies de arsénio nos produtos alimentares e calculadas as respectivas taxas de recuperação. Para estudar a exactidão dos resultados foi analisado o material de referência BCR-627 TUNA FISH, com valores certificados de AsB e DMA e NMIJ-7503a WHITE RICE, com valores certificados de As(III), As(V) e DMA. Os resultados obtidos para o arsénio total no pescado centraram-se entre 710 µg.kg-1 e 5978 µg.kg-1. O valor mais baixo observado diz respeito à corvina crua e o valor mais alto à dourada grelhada. Os estudos de especiação revelaram que, mesmo que as amostras de peixe contenham uma elevada concentração de arsénio, este apresenta-se na forma de AsB, em cerca de 90%. Aparentemente, os métodos culinários não aumentam a inter-conversão de espécies. No caso das amostras de arroz e papas de bebé, a concentração de arsénio situou-se entre 29 µg.kg-1 e 1143 µg.kg-1. O valor mais alto diz respeito ao farelo de arroz e o valor mais baixo às papas de bebé. Os resultados de especiação mostraram que 80% do arsenio estava presente na forma inorgânica e 20% como DMA, nas amostras de arroz e papas de bebé.