Browsing by Author "Silva, Elizabeth"
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- Avaliação externa da qualidade e acreditação do diagnóstico molecular da alteração JAK2: p.Val617Phe em neoplasias mieloproliferativasPublication . Silva, Elizabeth; Fonseca, Pedro; Theisen, Patrícia; Isidro, Glória; Vieira, Luís; Gonçalves, JoãoA Qualidade no diagnóstico molecular em genética humana é uma presença constante na rotina da nossa Unidade. A participação em programas de Avaliação Externa da Qualidade (AEQ), nomeadamente no United Kingdom National External Quality Assessment Service for Leucocyte Immunophenotyping (UK-NEQAS LI), é fundamental para manter o laboratório atualizado a nível das recomendações sobre as boas práticas em diagnóstico molecular, permitindo também a comparação do desempenho com outros laboratórios europeus e melhorar os relatórios dos testes genéticos. A nossa Unidade participa desde 2007 no programa de AEQ do UK-NEQAS LI para a deteção da alteração JAK2:p.Val617Phe (V617F), essencial no diagnóstico de neoplasias mieloproliferativas. Neste programa de AEQ, realizado três vezes por ano, são fornecidas amostras de linhas celulares liofilizadas para avaliação da presença/ausência da referida alteração. Os resultados dos ensaios e os detalhes da metodologia utilizada, são submetidos anonimizados à entidade organizadora. Desde o início da nossa participação nesta AEQ até 2018, foram analisadas 57 amostras. Destas, a alteração estava presente em 40 amostras e ausente em 17, sem falsos positivos ou falsos negativos. Os resultados todos validados pela entidade organizadora da AEQ, para além de confirmarem a reprodutibilidade, representatividade e repetibilidade para este teste genético, permitem validar anualmente a metodologia usada garantindo a sua especificidade e sensibilidade. Em conformidade com as recomendações específicas da Organização para a Cooperação e Desenvolvimento Económico (OCDE) para controlo de qualidade no diagnóstico genético molecular, possuímos desde 2018 acreditação para a pesquisa da alteração JAK2: p.Val617Phe (V617F), atribuída pelo Instituto Português de Acreditação (IPAC) no âmbito da norma ISO 15189. A acreditação ao abrigo desta norma é exigente, contribui para melhorar os testes genéticos na sua globalidade, pois compreende não só requisitos técnicos, como também requisitos de gestão. Esta acreditação contribui para melhorar a qualidade laboratorial a vários níveis, confere credibilidade, competência técnica e confiança. A acreditação e a participação na AEQ em causa, contribuem para melhorar o diagnóstico molecular dos doentes, para reduzir tempos de resposta, refletindo-se numa melhor vigilância e tratamento dos doentes.
- Caracterização de uma duplicação do braço longo do cromossoma 1,por microarray de alta resolução, em mielofibrose primária: um fator de malignidade?Publication . Silva, Maria Céu; Ambrósio, Ana Paula; Marques, Bárbara; Ventura, Catarina; Vieira, Luís; Silva, Elizabeth; Trindade, Maria Céu; Correia, HildebertoOs neoplasmas mieloproliferativos (NMP) são caracterizados por uma excessiva proliferação de uma ou mais linhagens da série mieloide. A mielofibrose primária (MFP) é uma das patologias deste grupo, que apresenta uma proliferação preferencial de megacariócitos e granulócitos na medula óssea (MO). Tem uma incidência anual de 0,5-1,5/100 000 indivíduos. Os doentes ao diagnóstico apresentam idades entre 60-70 anos independentemente do sexo. Os fatores de mau prognóstico são: idade > 70 anos, hemoglobina <10 g/dl; plaquetas <100 x106/L e cariotipo anormal. A maior causa de morbilidade e mortalidade da MFP é a falência da MO, ocorrência de eventos tromboembólicos, hipertensão portal, falência cardíaca e progressão para Leucemia Mieloide Aguda (LMA). Apresentamos um caso clínico, de um individuo do sexo feminino, com 68 anos à data do diagnóstico inicial, que apresentava anemia moderada e trombocitose, sendo diagnosticada como metaplasia mieloide com mielofibrose. Foi realizado o cariotipo na MO, observando-se a presença de uma duplicação do braço longo do cromossoma 1 na região (1) (q21q32). A doente manteve-se estável e sem terapêutica até início 2009, tendo nesta altura realizado uma reavaliação do mielograma, e biopsia óssea que evidenciou uma mielofibrose em fase avançada. Fez em paralelo estudos por citogenética e a pesquisa da mutação V617F em Jak2, evidenciando a inexistência da referida mutação e confirmando-se a presença da duplicação. Iniciou terapêutica com substituto de eritropoietina. Atualmente, com 8 anos de evolução da doença apresenta-se sem queixas clínicas, independente de transfusões e mantendo a terapêutica. A duplicação da região (1) (q21q32) associada a NMP é uma anomalia rara, estando descritos 5 casos, dos quais apenas 2 são MFP. Dado que a doente em estudo não apresenta evolução para LMA (ao contrário do descrito por outros autores em neoplasmas mieloides (NM)) foram realizados estudos por citogenética molecular (FISH, e microarray de alta resolução), que confirmaram os pontos de quebra observados e não evidenciaram outras alterações para além da descrita. Com base na história clinica da doente e nos resultados, pode-se sugerir que a duplicação da região (1) (q21q32) por si só não induz uma evolução para LMA e que a existência de duplicação de genes correlacionados com esta patologia (ex: ARNT; entre outros) não é fator suficiente para uma progressão mais agressiva, contudo deverão ser realizados mais estudos com o intuito de esclarecer o papel desta alteração nos NM.
- Duplication of the long arm of chromosome 1 in primary myelofibrosis is a malignity factorPublication . Silva, Maria do Céu; Ambrósio, Ana Paula; Marques, Bárbara; Ventura, Catarina; Silva, Elizabeth; Trindade, Maria do Céu; Correia, HildebertoPrimary myelofibrosis (PMF) is one of the Myeloproliferative neoplasms (MPN), which presents a preferential proliferation of megakaryocytes and granulocytes in the bone marrow (BM). One of the causes of morbidity and mortality in PMF is the progression to Acute Myeloid Leukemia (AML). We present a clinical case, of a female individual, 68 years old at the time of the initial diagnosis, who presented moderate anemia and thrombocytosis, and diagnosed as myeloid metaplasia with myelofibrosis. The karyotype performed in the BM, resulted in a duplication of the long arm of chromosome 1, del(1)(q21q32). The patient remained stable and without therapy for 5 years having performed a myelogram at this time, and a bone biopsy that showed an advanced myelofibrosis. In parallel, cytogenetic studies and search for V617F mutation in the Jak2 gene, indicated the absence of the mutation V617F, and confirmed the presence of the dup(1)(q21q32). the patient started therapy with an erythropoietin substitute. Currently, with 8 years of evolution of the disease, she has no clinical complaints, without transfusions and maintaining therapy. The dup(1)(q21q32) associated with MPN is a rare anomaly and is associated with AML evolution. Since the patient understudy did not evolve to AML, FISH, and high-resolution microarray studies were performed. The studies confirmed the observed breacpoints and did not show other changes Based on the patient's clinical history and results, we suggest that the dup(1)(q21q32) alone does not induce an evolution to AML and that the duplication of genes correlated with this pathology (ex: ARNT, among others) is not a sufficient factor for the development of a more aggressive progression. However, more studies should be carried out in order to clarify the role of this alteration in NM.