Browsing by Author "Lopes, Lurdes"
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- 3- Methylcrotonyl-coa Carboxylase Deficiency: Biochemical and Molecular Studies in 36 PatientsPublication . Fonseca, Helena; Sousa, Carmen; Marcão, Ana; Rocha, Hugo; Lopes, Lurdes; Vilarinho, Laura3-methylcrotonylglycinuria (MCG) is a disease included in the expanded newborn screening that until recently was considered a rare inherited disorder of the metabolism. In the catabolism of leucine, MCG is blocked in the fourth step due to deficiency of the enzyme 3-methylcrotonyl-CoA carboxylase (3-MCC) (Dantas et al). The biochemical diagnosis of disability in 3-MCC is characterized by marked increase of acid 3-hydroxyisovaleric (3-HIVA) and 3-methylcrotonylglycine (3-MCG) in urine and high concentrations of 3-hydroxyisovalerylcarnitine (C5-OH) in the blood. The molecular characterization is the study of genes MCCA and MCCB that encodes the enzyme 3-MCC. The authors report biochemical and mutation data of 36 MCC deficient individuals, one diagnosed due to clinical symptoms, 25 identified by newborn screening and 10 mothers identified following the positive newborn screening of their sons. All patients had an increased value of C5-OH, primary biochemical marker screening for this condition. In this cohort of 36 patients the genetic study intended to identify the pathogenic mutations using an analysis of 19 exons in the MCCA gene and 17 exons in the MCCB gene. A total of 32 mutations were detected of which 24 (75%) have, neither been described in the literature nor in the Human Gene Mutation Database. The results described show that the genotype cannot predict the phenotype or metabolic risk of these cases, but it is capable to confirm the diagnosis in doubtful cases. The clinical phenotype is very heterogeneous, most patients showing different mutations making the phenotype-genotype correlation difficult. The 3-MCC deficiency is a pathology not completely understood described as a genetic condition with low clinic penetrance. However, it can lead to a severe clinic phenotype resembling classic organic acidurias, has it was recently demonstrated by Grunert et al. Dantas, M. F., T. Suormala, et al. (2005). 3-Methylcrotonyl-CoA carboxylase deficiency: mutation analysis in 28 probands, 9 symptomatic and 19 detected by newborn screening.
- 3-Methylcrotonyl CoA Carboxylase Deficiency: Disorder or Just a Biochemical Phenotype?Publication . Fonseca, Helena; Bueno, Maria; Sousa, Carmen; Marcão, Ana; Lopes, Lurdes; Rocha, Hugo; Vilarinho, LauraIntroduction: 3-methylcrotonyl-CoA carboxylase deficiency (MCCD) was considered extremely rare before newborn screening (NBS) was undertaken but is now found in a number of asymptomatic babies or sometimes their mothers. This disorder of leucine metabolism, is the commonest organic aciduria found by screening, with a incidence of about 1:32 392 in our country. The clinical phenotype has been shown to vary considerably, ranging from entirely asymptomatic to death in infancy. A review of the literature on 37 individuals indicates that only 27% developed normally and stayed completely asymptomatic. Approximately 30% were reported to suffer from muscular hypotonia and psychomotor retardation, and almost half suffer from various other neurological symptoms. Even a lethality of 11% was observed. The metabolic phenotype characterizing MCCD is the elevated excretion of the diagnostic compounds 3-methylcrotonylglycine and 3-hydroxyisovaleric acid, and the presence of abnormally elevated blood levels of 3-hydroxyisovalerylcarnitine (C5-OH), as determined by tandem mass spectrometry (MS/MS). Patient and methods: The authors present a symptomatic case with an increase of C5-OH in the acylcarnitine profile who have a developmental delay. Blood spot samples from newborns are collected between day 3 and 6 in Watman 903 filter paper. Acylcarnitines in samples are analysed by MS/MS. Genes MCCA and MCCB that encodes the enzyme 3-MCC were studied by reported methods. Results: The molecular study has allowed the identification of the compound heterozygous in this patient: the frameshift mutation p.S173FfsX25 and the missense mutation p.V339M. Both mutations are described in the literature. Discussion: The newborn screening identification of a patient which developed symptoms seems to indicate that this disease should be included in NBS programs. More studies are needed to find genetic and/or biochemical markers that explain why a relatively small number of individuals are at risk of developing a severe disease phenotype. Another important reason to include MCCD in our panel is that other disorders are also detected by the marker C5OH; for example deficiencies of holocarboxylase synthetase, and 3-hydroxy- 3-methylglutaryl-CoA lyase.
- 3-Methylcrotonylglycinuria: a new common mutation in the Portuguese population?Publication . Fonseca, Helena; Sousa, Carmen; Marcão, Ana; Rocha, Hugo; Lopes, Lurdes; Vilarinho, LauraIntroduction: 3-Methylcrotonylglycinuria (MCG) is an inborn error of the leucine catabolism resulting from isolated biotin-insensitive deficiency of 3-methylcrotonyl-CoA carboxylase (3-MCC), the enzyme converting 3-methylcrotonoyl-CoA to 3-methylglutaconyl-CoA. The metabolic phenotype characterizing MCC deficiency is the elevated excretion of the diagnostic compounds 3-methylcrotonylglycine and 3-hydroxyisovaleric acid, and the presence of abnormally elevated blood levels of 3-hydroxyisovalerylcarnitine (C5-OH), as determined by tandem mass spectrometry (MS/MS). Expanded newborn screening for inborn errors of metabolism using MS/MS has demonstrated that 3-MCC deficiency is one of the most commonly detected inherited organic acidurias. Patient and methods: The authors report the results of molecular studies performed in six cases in a universe of thirty patients with an increase of C5-OH in the acylcarnitine profile. Blood spot samples from newborns are collected between day 3 and 6 in Watman 903 filter paper. Acylcarnitines in samples are analysed in tandem mass spectrometer. The molecular characterization is the study of genes MCCA and MCCB that encodes the enzyme 3-MCC. Results: The six cases showed the same novel mutation p.N230D in the MCCB gene, proving that this is the most common new mutation in our population. According to the studies conducted to this new mutation using bioinformatic applications, it is considered a benign mutation, but the alignment of species and the population study conducted, showed that this mutation is responsible for the biochemical phenotype found in these cases. Discussion: Of the thirty MCC cases studied, p.N230D mutation revealed to be the most frequent new mutation. Bioinformatic analysis showed that this mutation is located in a non conserved area but the mutant residue was never present in the homologous proteins analyzed.
- Aplicação dos marcadores IRT/PAP/IRT no rastreio neonatal da fibrose quísticaPublication . Lopes, Lurdes; Marcão, Ana; Carvalho, Ivone; Sousa, Carmen; Fonseca, Helena; Rocha, Hugo; Vilarinho, LauraA Fibrose Quística (FQ) é uma doença genética, com transmissão autossómica recessiva. Bioquimicamente deve-se à deficiência na proteína Cystic Fibrosis Transmembrane Condutance Regulator que é codificada pelo gene CFTR, localizado no cromossoma 7. Estão descritas cerca de 2000 variantes genéticas associadas a esta doença. Iniciou-se no final de 2013 um estudo piloto integrado no Programa Nacional de Diagnóstico Precoce (PNDP), que incluiu 80,000 recém-nascidos (RN). O aumento da concentração sanguínea da tripsina imunoreactiva (IRT) nos primeiros dias de vida dos RN com FQ possibilita o rastreio neonatal desta doença. No entanto, apesar de uma boa sensibilidade (95%), o IRT não é um marcador específico (34-75%) para a FQ, e um rastreio baseado unicamente neste marcador tem um número elevado de falsos positivos. Por esta razão, têm sido propostos vários algoritmos de rastreio, incluindo outros marcadores bioquímicos como a Proteína Associada à Pancreatite (PAP). Neste estudo, o algoritmo de rastreio utilizado baseia-se na determinação do IRT / PAP / IRT em sangue colhido em papel de filtro, sendo a amostra de sangue a mesma colhida para as restantes doenças rastreadas. Neste estudo foram identificadas 680 amostras com valor elevado de IRT ao rastreio, mas apenas em 272 casos foram solicitadas novas amostras por apresentarem também aumento de PAP. Esta estratégia reduziu significativamente os pedidos de segunda amostra de sangue. Foram diagnosticados neste estudo 11 doentes, o que implica uma prevalência ao nascimento de aproximadamente 1:7,200, no entanto este estudo será alargado a mais 80,000 RN para estabelecermos a real prevalência desta patologia na nossa população.
- Aplicação dos marcadores IRT/PAP/IRT no rastreio neonatal da fibrose quísticaPublication . Lopes, Lurdes; Marcão, Ana; Carvalho, Ivone; Sousa, Carmen; Fonseca, Helena; Rocha, Hugo; Vilarinho, LauraA Fibrose Quística (FQ) é uma doença genética, com transmissão autossómica recessiva. Bioquimicamente deve-se à deficiência na proteína Cystic Fibrosis Transmembrane Condutance Regulator que é codificada pelo gene CFTR, localizado no cromossoma 7. Estão descritas cerca de 2000 variantes genéticas associadas a esta doença. Iniciou-se no final de 2013 um estudo piloto integrado no Programa Nacional de Diagnóstico Precoce (PNDP), que incluiu 80,000 recém-nascidos (RN). O aumento da concentração sanguínea da tripsina imunoreactiva (IRT) nos primeiros dias de vida dos RN com FQ possibilita o rastreio neonatal desta doença. No entanto, apesar de uma boa sensibilidade (95%), o IRT não é um marcador específico (34-75%) para a FQ, e um rastreio baseado unicamente neste marcador tem um número elevado de falsos positivos. Por esta razão, têm sido propostos vários algoritmos de rastreio, incluindo outros marcadores bioquímicos como a Proteína Associada à Pancreatite (PAP). Neste estudo, o algoritmo de rastreio utilizado baseia-se na determinação do IRT / PAP / IRT em sangue colhido em papel de filtro, sendo a amostra de sangue a mesma colhida para as restantes doenças rastreadas. Neste estudo foram identificadas 680 amostras com valor elevado de IRT ao rastreio, mas apenas em 272 casos foram solicitadas novas amostras por apresentarem também aumento de PAP. Esta estratégia reduziu significativamente os pedidos de segunda amostra de sangue. Foram diagnosticados neste estudo 11 doentes, o que implica uma prevalência ao nascimento de aproximadamente 1:7,200, no entanto este estudo será alargado a mais 80,000 RN para estabelecermos a real prevalência desta patologia na nossa população.
- Congenital adrenal hyperplasia in paediatric age: molecular analysis of the CYP21A2 gene and implications for genetic counsellingPublication . Gomes, Susana; Silva, Júlia; Pereira-Caetano, Iris; Lopes, Lurdes; Limbert, Catarina; Amaral, Daniela; Pina, Rosa; Kay, Teresa; Sampaio, Lurdes; Pereira, Carla; Moldovan, Oana; Berta, Ana; Rebelo, Irene; Gaspar, Isabel; Cidade Rodrigues, José; Lina, Ramos; Ramos, Fabiana; Dinis, Isabel; Cardoso, Rita; Mirante, Alice; Gonçalves, JoãoIntroduction: Congenital adrenal hyperplasia(CAH) is due to 21-hidroxilase deficiency(21-OHD) in about 95% of the cases. 21-OH is encoded by CYP21A2 gene, and most frequent mutations occurring in CYP21A2 are due to gene conversions originated from its pseudogene(CYP21A1P). The clinical severity of CAH is associated with the impairment of 21-OH activity, which is directly related with the molecular defect. CAH is classified as classic salt-wasting(SW) and simple virilising(SV) forms, and nonclassic(NC) form of the disease. SW and SV are usually diagnosed after birth or during the first years of life, respectively, while most cases of NC-CAH are diagnosed during infancy, puberty or until adult age. Here we present the molecular results performed in paediatric patients with CAH.
- Congenital adrenal hyperplasia with a CYP21A2 deletion overlapping the tenascin-X gene: an atypical presentationPublication . Ivo, Catarina Rodrigues; Fitas, Ana Laura; Madureira, Inês; Diamantino, Catarina; Gomes, Susana; Gonçalves, João; Lopes, LurdesObjectives: Congenital Adrenal Hyperplasia (CAH) is a group of genetic diseases characterized by impaired cortisol biosynthesis. 95% of CAH cases result from muta tion in the CYP21A2 gene encoding 21-hydroxilase. TNX-B gene partially overlaps CYP21A2 and encodes a matrix protein called Tenascin-X (TNX). Complete tenascin defi ciency causes Enlers-Danlos syndrome (EDS). A mono allelic variant called CAH-X CH-1 was recently described, resulting from a CYP21A2 complete deletion that extends into the TNXB. This haploinsufficiency of TNX may be associated with a mild hypermobility form of EDS, as well as other connective tissue comorbidities such as hernia, cardiac defects and chronic arthralgia. Case presentation: We report four patients heterozygous for a CAH-X CH-1 allele that do not present clinical mani festations of the EDS. Conclusions: All CAH patients, carriers of these TNXA/ TNXB chimeras, should be evaluated for clinical manifes tations related to connective tissue hypermobility, cardiac abnormalities and other EDS features, allowing for better clinical surveillance management
- Cystic Fibrosis Newborn Screening in Portugal: PAP Value in Populations with Stringent Rules for Genetic StudiesPublication . Marcão, Ana; Barreto, Celeste; Pereira, Luísa; Vaz, Luísa; Cavaco, José; Casimiro, Ana; Félix, Miguel; Silva, Teresa; Barbosa, Telma; Freitas, Cristina; Nunes, Sidónia; Felício, Verónica; Lopes, Lurdes; Amaral, Margarida; Vilarinho, LauraNewborn screening (NBS) for cystic fibrosis (CF) has been shown to be advantageous for children with CF, and has thus been included in most NBS programs using various algorithms. With this study, we intend to establish the most appropriate algorithm for CF-NBS in the Portuguese population, to determine the incidence, and to contribute to elucidating the genetic epidemiology of CF in Portugal. This was a nationwide three-year pilot study including 255,000 newborns (NB) that were also screened for congenital hypothyroidism (CH) and 24 other metabolic disorders included in the Portuguese screening program. Most samples were collected in local health centers spread all over the country, between the 3rd and 6th days of life. The algorithm tested includes immunoreactive trypsinogen (IRT) determination, pancreatitis associated protein (PAP) as a second tier, and genetic study for cases referred to specialized clinical centers. Thirty-four CF cases were confirmed positive, thus indicating an incidence of 1:7500 NB. The p.F508del mutation was found in 79% of the alleles. According to the results presented here, CF-NBS is recommended to be included in the Portuguese NBS panel with a small adjustment regarding the PAP cut-off, which we expect to contribute to the improvement of the CF-NBS performance. According to our results, this algorithm is a valuable alternative for CF-NBS in populations with stringent rules for genetic studies.
- Estratégia utilizada no estudo piloto para o rastreio neonatal da fibrose quísticaPublication . Lopes, LurdesO Programa Nacional de Diagnóstico Precoce (PNDP) realiza-se em Portugal desde 1979, e atualmente inclui o rastreio neonatal de 24 Doenças Hereditárias do Metabolismo (DHM) e do Hipotiroidismo Congénito (HC). Em Outubro de 2013 iniciou-se, um estudo piloto para o rastreio neonatal da Fibrose Quística (FQ), que deverá ser efetuado em 80000 recém-nascidos (RN) portugueses ao longo de aproximadamente um ano. A Fibrose Quística (Mucoviscidose) é uma doença metabólica genética, com transmissão autossómica recessiva, e que tem uma prevalência média ao nascimento de 1:3000 RN, na população caucasiana. Bioquimicamente deve-se à deficiência na proteína CFTR, codificada pelo gene CFTR, localizado no cromossoma 7. Estão descritas cerca de 2000 variantes genéticas associadas à FQ. Clinicamente é uma doença grave com atingimento multissistémico, caracterizada pela disfunção das glândulas exócrinas, incluindo o pâncreas, as glândulas sudoríparas e as glândulas mucosas dos tratos respiratório, gastrointestinal e reprodutivo. O aumento dos valores de ião cloreto no suor é típico destes doentes, sendo o “teste do suor” a principal análise de confirmação da doença. Diagnosticar precocemente a doença é uma fator decisivo no prognóstico, não só pela maior sobrevida, mas também para uma melhor qualidade de vida do doente. O aumento da concentração sanguínea da tripsina imunoreactiva (IRT) nos 1os dias de vida dos RN com FQ possibilita o rastreio neonatal desta doença. No entanto, apesar de uma boa sensibilidade, o IRT não é um marcador específico para a FQ, e um rastreio baseado unicamente neste marcador tem um número inaceitável de falsos positivos. Por esta razão, têm sido propostos vários algoritmos de rastreio, incluindo outros marcadores bioquímicos como a Proteína Associada à Pancreatite (PAP) ou o estudo molecular. Neste estudo piloto, o algoritmo de diagnóstico utilizado baseia-se na determinação do IRT e do PAP em sangue colhido em papel de filtro, sendo a amostra de sangue a mesma colhida para os restantes rastreios. No âmbito deste projeto já foram estudados cerca de 29 000 RN e identificados 6 casos positivos. No final deste estudo deverá ser avaliada a inclusão da FQ no PNDP e o algoritmo de rastreio a utilizar.
- Estudo piloto para o rastreio neonatal da fibrose quísticaPublication . Lopes, Lurdes; Marcão, Ana; Carvalho, Ivone; Sousa, Carmen; Fonseca, Helena; Rocha, Hugo; Vilarinho, LauraO Programa Nacional de Diagnóstico Precoce (PNDP) realiza-se em Portugal desde 1979, e atualmente inclui o rastreio neonatal de 24 Doenças Hereditárias do Metabolismo (DHM) e do Hipotiroidismo Congénito (HC). Em Outubro de 2013 iniciou-se, um estudo piloto para o rastreio neonatal da Fibrose Quística (FQ), que deverá ser efetuado em 80000 recém-nascidos (RN) portugueses ao longo de aproximadamente um ano. A Fibrose Quística (Mucoviscidose) é uma doença metabólica genética, com transmissão autossómica recessiva, e que tem uma prevalência média ao nascimento de 1:3000 RN, na população caucasiana. Bioquimicamente deve-se à deficiência na proteína CFTR, codificada pelo gene CFTR, localizado no cromossoma 7. Estão descritas cerca de 2000 variantes genéticas associadas à FQ. Clinicamente é uma doença grave com atingimento multissistémico, caracterizada pela disfunção das glândulas exócrinas, incluindo o pâncreas, as glândulas sudoríparas e as glândulas mucosas dos tratos respiratório, gastrointestinal e reprodutivo. O aumento dos valores de ião cloreto no suor é típico destes doentes, sendo o “teste do suor” a principal análise de confirmação da doença. Diagnosticar precocemente a doença é uma fator decisivo no prognóstico, não só pela maior sobrevida, mas também para uma melhor qualidade de vida do doente. O aumento da concentração sanguínea da tripsina imunoreactiva (IRT) nos 1os dias de vida dos RN com FQ possibilita o rastreio neonatal desta doença. No entanto, apesar de uma boa sensibilidade, o IRT não é um marcador específico para a FQ, e um rastreio baseado unicamente neste marcador tem um número inaceitável de falsos positivos. Por esta razão, têm sido propostos vários algoritmos de rastreio, incluindo outros marcadores bioquímicos como a Proteína Associada à Pancreatite (PAP) ou o estudo molecular. Neste estudo piloto, o algoritmo de diagnóstico utilizado baseia-se na determinação do IRT e do PAP em sangue colhido em papel de filtro, sendo a amostra de sangue a mesma colhida para os restantes rastreios. No âmbito deste projeto já foram estudados cerca de 15000 RN e identificados 2 casos positivos. No final deste estudo deverá ser avaliada a inclusão da FQ no PNDP e o algoritmo de rastreio a utilizar.