Instituto Nacional de Saúde Doutor Ricardo Jorge
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- Estudos Funcionais de Variantes no Gene APOB em Doentes com Diagnóstico Clínico de Hipercolesterolemia FamiliarPublication . Ramos, Diana Catarina Fernandes; Bourbon, Mafalda; Alves, Ana CatarinaA hipercolesterolemia familiar (FH) é uma doença caracterizada por níveis elevados de colesterol LDL, que se acumulam nas artérias, promovendo o desenvolvimento precoce de eventos cardiovasculares. Geneticamente, a FH é transmitida de forma autossómica semi-dominante, sendo causada por variantes nos genes LDLR, APOB e PCSK9. As variantes no gene APOB afetam a ligação do colesterol LDL ao seu recetor, representando 5 a 10% dos casos de FH. No entanto, para a maioria das variantes identificadas, o efeito funcional na proteína ainda não está determinado. Esta dissertação teve como objetivo principal investigar a correlação entre fenótipo e genótipo, além de caracterizar funcionalmente variantes identificadas no gene APOB em indivíduos com diagnóstico clínico de FH na população portuguesa. Como objetivo secundário, foi desenvolvida uma base de dados que reúne todas as variantes deste gene com estudos funcionais realizados até ao momento. A identificação das variantes foi realizada por sequenciação de nova geração (NGS) e confirmada por PCR e sequenciação de Sanger, seguida da pesquisa da variante nos familiares dos casos index. As variantes em estudo foram identificadas no âmbito do projeto EPHF. O LDL dos participantes foi isolado por ultracentrifugação a partir do soro de casos index e familiares com variantes no gene APOB, bem como de indivíduos normolipidémicos. Este LDL foi marcado com fluorescência e incubado em células CHO-ldlΔ7 para avaliar a capacidade de ligação e internalização do LDL. A caracterização funcional, realizada por citometria de fluxo com LDL fluorescente, revelou que as variantes p.(Asp1456Asn), p.(Val4295Leu) e p.(Arg4519Thr) apresentavam ligação e internalização normais do LDL, indicando que estas variantes não comprometem a função da proteína. Este trabalho destaca a importância de caracterizar funcionalmente as variantes no gene APOB para melhorar o diagnóstico dos indivíduos com FH, possibilitando tratamentos mais adequados a cada caso e contribuindo para a redução do risco cardiovascular.
- Variantes no gene APOB associadas a hipobetalipoproteinemia e hipercolesterolemia familiar: estudos funcionais e relação genótipo/fenótipoPublication . Rato, Inês de Carvalho Santos; Alves, Ana Catarina; Bourbon, MafaldaAs dislipidemias são um grupo de patologias caracterizadas por alterações no perfil lipídico, podendo incluir fenótipos de hiperlipidemia ou hipolipidemia. A apolipoproteína B (apoB), principal componente proteico do colesterol LDL (c-LDL), desempenha um papel essencial na regulação dos níveis de colesterol no sangue. Variantes no gene APOB estão associadas a condições distintas como a hipercolesterolemia familiar (FH) e a hipobetalipoproteinemia familiar (FHBL). A FH caracteriza-se por níveis elevados de c-LDL, que podem levar ao desenvolvimento de aterosclerose e doença coronária prematura. Por outro lado, a FHBL apresenta níveis reduzidos de c-LDL e está associada a complicações hepáticas, nutricionais e neurológicas. A compreensão dos efeitos das variantes no gene APOB é fundamental, sendo os estudos funcionais uma ferramenta indispensável, especialmente com o avanço da sequenciação de nova geração (NGS), que permite a análise completa do gene. O presente trabalho visou realizar estudos funcionais de variantes no gene APOB associadas a estas duas patologias, com o objetivo de aprofundar o conhecimento sobre os mecanismos moleculares subjacentes. A análise de variantes descritas na base de dados ClinVar revelou um elevado número associado tanto à FH como à FHBL, com muitas classificadas como variantes de significado clínico incerto (VUS). Foram realizados ensaios funcionais utilizando citometria de fluxo a partir de LDL de indivíduos com variantes no gene APOB associadas à hipercolesterolemia. Os resultados não identificaram nenhuma das variantes analisadas como causadora do fenótipo observado nos indivíduos. Consequentemente, não foi possível alterar a classificação destas variantes, que permanecem de significado incerto. Adicionalmente, foram analisados casos de FHBL e discutidas possíveis abordagens para estudos funcionais futuros. Este trabalho reforça a relevância de estudos funcionais para esclarecer o papel das variantes no gene APOB nas dislipidemias, contribuindo para um melhor diagnóstico e caracterização destas condições.