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Departamento de Genética Humana

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http://hdl.handle.net/10400.18/4

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Browsing Departamento de Genética Humana by advisor "Amaral, Olga A.M. Oliveira"

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  • Estudo da mutação W402X: frequência desta variante da α-L-iduronidase lisossomal na população portuguesa e análise da sua função
    Publication . Ribeiro, Diogo Alexandre do Nascimento; Amaral, Olga A.M. Oliveira; Maciel, Patrícia Espinheira de Sá
    As Doenças Lisossomais de Sobrecarga (DLSs) são um grupo de doenças metabólicas hereditárias raras. Na população portuguesa, as DLSs têm uma prevalência de aproximadamente 1/4000 nados vivos. A Mucopolissacaridose tipo I (MPS I) é uma doença autossómica recessiva, que resulta da actividade deficiente da enzima lisossomal α-L-iduronidase (IDUA), e está presente na população portuguesa com uma prevalência de 1.33/100000 nados vivos. Apesar da existência de mais de 100 mutações causais, a mutação W402X é a causa genética mais frequente; a homozigotia para a mutação W402X está associada ao fenótipo clínico mais grave (síndrome de Hurler, MPS IH). Assim, a relevância do estudo desta mutação é evidenciada pelo facto de se tratar de uma mutação pan-europeia relacionada com um fenótipo grave. Tem, inclusivamente, sido sugerido que esta mutação pode ser uma chave essencial para a compreensão da patofisiologia da MPS IH. Surgiram três questões principais que justificaram uma investigação mais aprofundada: qual seria a frequência da mutação W402X na população portuguesa? Existiria um haplótipo comum nos alelos mutados detectados? Seria possível melhorar o fenótipo e, talvez, recuperar parcialmente a função deste mutante, utilizando mecanismos de supressão nonsense? Neste trabalho determinou-se que a frequência alélica da mutação W402X na população portuguesa em geral é de 0,20% (IC: 0,08-0,39), utilizando duas técnicas de genotipagem distintas, PCRRFLP e PCR-dHPLC. Em termos de haplótipos foi encontrada variabilidade nos alelos mutados detectados, o que parece indicar uma grande divergência entre os alelos W402X. Aparentemente o SNP mais frequentemente associado à mutação W402X em portugueses e brasileiros é o Q33H, seria interessante saber se na população irlandesa esta associação também se verifica. Adicionalmente, ao caracterizar funcionalmente a mutação W402X do gene IDUA, comprovou-se que, não só, esta mutação resulta em nonsense mediated decay, mas também que é susceptível a mecanismos de supressão de nonsense com dois compostos distintos, a gentamicina e a cicloheximida (CHX). Face aos resultados obtidos com os diferentes tratamentos, o efeito de supressão da CHX na mutação nonsense W402X do gene IDUA provou ser o mais eficaz. Verificou-se que o aumento de expressão do gene IDUA na linha celular de um doente MPS IH homozigótico para a mutação W402X permitiu atingir níveis semelhantes aos da linha celular controlo não sujeita a tratamento.
    2012Master thesis Open access Show more