Bajanca-Lavado, Maria PaulaJordão, LuísaCunha Batista, Beatriz2019-03-252019-03-252018-10-08http://hdl.handle.net/10400.18/6292Dissertação de mestrado em Bioquímica apresentada à Faculdade de Ciências e Tecnologia, Universidade Nova de Lisboa, 2018Trabalho desenvolvido no Laboratório Nacional de Referência de Infeções Respiratórias, no Departamento de Doenças Infeciosas do Instituto Nacional de Saúde Doutor Ricardo Jorge.Haemophilus influenzae is a commensal microorganism of the human nasopharynx, responsible for both invasive and non-invasive diseases. This work focused on the study of 93 H. influenzae isolates, collected between 2013 and 2018, from patients with two epidemiologically relevant non-invasive diseases: Chronic Obstructive Pulmonary Disease (COPD) and Otitis Media (OM). Phenotypical and molecular characterizations were performed for the isolates, regarding capsular typing, β-lactamase production, antibiotic susceptibility, genetic diversity by MLST, presence/absence of virulence factors (pilA, hifA, hmw1A, hmw2A, hia and ompP5) and ability to produce biofilms. COPD isolates were collected from adults (100%), while 98.2% of OM isolates were collected from children. Non-typeable H. influenzae (NTHi) was the aetiological agent in COPD (97.4%) and OM (100%). Regarding antibiotic susceptibility, it should be noticed that 15.1% of the isolates were β-lactamase producers. MLST revealed a high genetic diversity among COPD and OM isolates, with 31 STs in 41 analysed isolates. pilA and ompP5 genes were present in more than 50% of COPD and OM isolates. hifA and hia genes were identified in less than half of the isolates, with a higher prevalence of these among OM isolates. hmw1A and hmw2A genes were respectively identified in 25.5% and 32.7% of OM isolates, while both hmw genes were present in 76.3% of COPD isolates. Biofilm production was observed for 14.0% and 29.0% of all isolates after 24h and 48h, respectively. No relationship between biofilm production and clinical source could be established, as well as with the presence of virulence factors (pilA, hmw1A e hmw2A) involved in biofilm production. COPD and OM are frequently associated with NTHi. Since no vaccines are available, monitoring of these diseases is highly recommended, as these constitute a Public Health threat associated with a high economic and social burden.Haemophilus influenzae é um microrganismo comensal da nasofaringe humana, responsável por doenças invasivas e não-invasivas. Este trabalho focou-se no estudo de 93 estirpes de H. influenzae, isolados entre 2013 e 2018, de indivíduos com duas doenças nãoinvasivas epidemiologicamente relevantes: Doença Pulmonar Obstrutiva Crónica (DPOC) e Otite Média (OM). As estirpes foram caraterizadas, fenotípica e molecularmente, relativamente à presença de cápsula, produção de β-lactamase, suscetibilidade a antibióticos, diversidade genética por MLST, presença/ausência de fatores de virulência (pilA, hifA, hmw1A, hmw2A, hia e ompP5) e a capacidade para formar biofilmes. A DPOC incidiu numa população adulta (100%), enquanto a OM foi predominante em crianças (98,2%). Verificou-se que o H. influenzae não capsulado (HiNC) foi o agente etiológico responsável pela DPOC (97,4%) e OM (100%). Relativamente à susceptibilidade aos antibióticos, há a destacar a produção de β-lactamase em 15,1% das estirpes. O MLST revelou uma elevada diversidade genética, tanto na DPOC como na OM, com a caraterização de 31 STs em 41 estirpes analisadas. Os genes pilA e ompP5 foram identificados em mais de 50% dos isolados de DPOC e OM. Os genes hifA e hia foram encontrados em menos de metade dos isolados, tendo-se verificado uma maior prevalência na OM. Os genes hmw1A e hmw2A foram identificados, respetivamente, em 25,5% e 32,7% das estirpes de OM, estando ambos presentes em 76,3% das estirpes de DPOC. A formação de biofilmes foi observada em 14,0% e 29,0% das estirpes após 24h e 48h, respetivamente. Não foi possível estabelecer uma relação entre formação de biofilmes e origem clínica, nem com a presença de fatores de virulência (pilA, hmw1A e hmw2A) envolvidos na produção de biofilmes. DPOC e OM são doenças frequentemente associadas a HiNC. Não existindo uma vacina disponível, é importante a sua monitorização, pelo impacto social e económico que representam em Saúde Pública.engHaemophilus influenzaeOtitis MediaChronic Obstructive Pulmonary DiseaseVirulence FactorsNon-typeable H. influenzaeBiofilmsDoença Pulmonar Obstrutiva CrónicaOtite MédiaFatores de VirulênciaBiofilmesH. influenzae não capsuladoInfecções Respiratóriasmaster thesis