David, DezsoCarlos, Araújo2015-02-172015-02-172014http://hdl.handle.net/10400.18/2860Dissertação de mestrado em Genética Molecular e Biomedicina apresentado à Faculdade de Ciências e Tecnologia da Universidade Nova de Lisboa, 2013Dezso David, investigador do Departamento de Genética Humana do INSA.[ENG] Peter’s anomaly (PA) is a congenital defect of the anterior chamber of the eye. The aim of this study is molecular characterization of a de novo balanced chromosome translocation [t(11;18)(q23.3;q11.2)] identified in a proband with syndromic form of Peter´s anomaly (ectopia lentis and mild CNS abnormalities). Chromosome breakpoints were identified at nucleotide resolution. The 11q23.3 breakpoint is at position 120,097,868 (genome assembly GRCh37/hg19) within intron 3 of out at first (OAF) homolog (Drosophila) gene (OAF) while, 18q11.2 breakpoint in the intergenic region between CTAGE1 and RBBP8 genes, at position 20,220,714. Although OAF is disrupted, its expression level is unchanged in proband´s lymphoblastoid cell line (LCL). Cell adhesion protein Nectin 1 or PVRL1, located 500 kb upstream from the 11q23.3 breakpoint, reveal 3.5 fold increase in proband’s LCL. Expression levels of additional genes from breakpoint regions are not significantly different. Furthermore, RT-qPCR confirmed that expression level of CYP1B1 from chromosome 2p22.2, and EDIL3 from chromosome 5q14 are significantly changed in proband´s LCL, 16.5 fold decreased and 126 fold increased, respectively. Alterations in CYP1B1 have been reported as PA causing mutations. Therefore, mutation screening of CYP1B1 was performed and no pathogenic mutation was identified in the proband, although, a disease-causing 13 bp, homozygous deletion was identified in a Portuguese patient with PA. In conclusion, we hypothesize that PVRL1 is a candidate gene for at least some of the observed clinical features, which is elicited in mouse models by association of its paralog Pvrl3 to lens and other ocular defects involving the ciliary body. Furthermore, the involvement of the POU family domain containing transcription factor (POU2F3) from 11q23.3, CYP1B1 and/or EDIL3, localized outside of the breakpoint regions, in the molecular pathogenesis of syndromic PA remains to be determined.[PT] A anomalia de Peters é um defeito congénito da camara anterior do olho. Este estudo tem como objetivo caracterizar molecularmente uma translocação cromossómica equilibrada de novo [t(11;18)(q23.3;q11.2)] identificada num proband com forma sindrómica de Peters, (ectopia lentis e ligeiras anomalias do SNS). Os pontos de quebra foram identificados ao nível da resolução nucleotídica. O ponto de quebra 11q23.3 está na posição g.120,097,868_120,097,869 (GRCh37/hg), no intrão 3 do out of first protein homolog (OAF) enquanto o ponto de quebra 18q11.2, região intergénica entre o CTAGE1 e o RBBP8 encontra-se na posição g.20,220,714_20,220,715. Apesar do OAF estar interrompido, o nível de expressão está inalterado em linha linfoblastóide (LCL) do proband. O PVRL1, localizado a 500 kb a montante do ponto de quebra 11q23.3, revelou um aumento de 3.5 vezes no proband. Os níveis de expressão dos genes adicionais aos pontos de quebra não foram significativamente diferentes. Confirmou-se por RT-qPCR que os níveis de expressão do CYP1B1 (2p22.2), e EDIL3 (5q14) estão significativamente alterados em LCL do proband, com redução de 16,5 vezes e aumento de 126 vezes, respetivamente. Alterações no CYP1B1 têm sido descritas como mutações causadoras de PA. Desta forma, a pesquisa de mutações no CYP1B1 não encontraram mutações patogénicas no proband, no entanto foi identificado uma deleção em homozigotia com13 nucleótidos causador de doença num paciente Português com PA. Em conclusão, sugerimos que o PVRL1 é o principal gene candidato para parte da clínica descrita, o qual é sustentado por modelos de murganho pela associação com o seu parálogo PVRL3 para o cristalino e para outros defeitos oculares no corpo ciliar. Por outro lado, o envolvimento com o factor de transcrição, contendo o domínio da família POU, da região do ponto de quebra 11q23.3 e o CYP1B1 ou EDIL3, subjacente à patogénese molecular do fenótipo observado contínua por ser determinado.engTranslocações Cromossómicas EquilibradasAnomalia de PetersEctopia LentisPVRL1CYP1B1EDIL3Doenças GenéticasChromosome Balanced TranslocationPeter´s AnomalyEctopia Lentismaster thesis