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Título: Quantificação de quatro imunossupressores por cromatografia líquida com detecção por espectrometria de massa “tandem”
Autor: Barreira, Maria João
Issue Date: 7-Oct-2011
Editora: Instituto Nacional de Saúde Doutor Ricardo Jorge, IP
Resumo: A monitorização terapêutica dos imunossupressores no sangue é fundamental em doentes após o transplante de órgãos sólidos devido à sua estreita janela terapêutica e à sua elevada variabilidade intra e inter individual. O objectivo deste estudo é o de implementar um método rápido e simples, por cromatografia líquida com detecção por espectrometria de massa “tandem” (LC-MS/MS), para a determinação simultânea dos imunossupressores ciclosporina A (CsA), everolimus (Ever), sirolimus (Sir) e tacrolimus (Tac). Este método baseou-se num método desenvolvido pela AB Sciex, tendo sido efectuada a optimização das condições de preparação da amostra assim como a avaliação dos parâmetros de desempenho do método, utilizando para isso 6 calibradores e 3 controlos, contendo diferentes concentrações dos quatro imunossupressores, CsA, Ever, Sir e Tac. A avaliação da linearidade foi efectuada com base na aplicação de diversos testes estatísticos incluindo análise de resíduos, coeficientes de correlação, teste de RIKILT e teste de Mandel. Os resultados mostraram que o método é linear entre 48 e 1350 ng/mL para a Cs A, entre 2,6 e 44,9 ng/mL para Ever, entre 2,7 e 44,3 ng/mL para Sir e entre 2,5 e 39,7 ng/mL para Tac. Os limites de quantificação (LOQ) estimados com base no desvio padrão residual da curva de calibração são de 48 ng/mL para Cs A, 2,6 ng/mL para Ever, 2,7 ng/mL para Sir e 2,5 para Tac. Os estudos de repetibilidade foram efectuados utilizando três padrões de concentração baixa, média e alta, preparados de forma independente. Os valores obtidos para o desvio padrão relativo (RSD%) foram inferiores a 10% para CsA e Tac e inferiores a 15% para Ever e Sir. A exactidão do método tem vindo a ser avaliada através da participação nos ensaios de avaliação externa da qualidade organizados pelo UK NEQAS (United Kingdom National External Quality Assessement Scheme). Durante o presente ano os valores de “Bias” têm sido na mairitariamente inferiores a 20% esempre inferiores a 30%. Os valores de Z-score têm-se situado entre -2 e 2. Este método foi utilizado para determinar os níveis de everolimus em 35 amostras de sangue de doentes com transplante e os resultados mostram que em 60% das amostras analisadas as concentrações de everolimus se situam abaixo dos valores considerados como terapêuticos e em 2,8% dos casos os níveis sanguíneos de everolimus situam-se acima do intervalo de concentração terapêutica. O método de LC-MS/MS apresenta um bom desempenho analítico, permitindo analisar de forma rápida, específica e exacta os imunossupressores CsA, Ever, Sir e Tac, em amostras de sangue total, o que faz dele um método adequado para utilizar na monitorização terapêutica destes fármacos.
Descrição: Sem Área de Trabalho atribuída
URI: http://hdl.handle.net/10400.18/381
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